文档介绍：专题3
植物组织培养技术
课题1:菊花的组织培养
一、根底知识
1、植物的组织培养
〔1〕细胞的分化
①概念：
在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程
②过程：
如：受精卵增殖、生胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基那么需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素
生长素类：
2，4－二***苯氧乙酸〔2，4－D〕、吲哚乙酸〔IAA〕、萘乙酸〔NAA〕、吲哚丁酸〔IBA〕
细胞分裂素类：
冲动素〔KT〕、6－苄基嘌呤〔 6－BA〕、玉米素〔ZT〕
赤霉素类：
赤霉酸〔GA3〕
〔3〕植物激素的影响
②生长素和细胞分裂素作用
植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势
使用顺序
实验结果
先使用生长素，后使用细胞分裂素
有利于细胞分裂，但不利分化
先使用细胞分裂素后使用生长素
细胞既分裂也分化
同时使用
分化频率高
思考：以下培养基出现的现象反响了什么问题？
生长素 / 细胞分裂素
高 利于根和愈伤组织的形成
适中 利于根芽的分化
生长素
细胞分裂素：
>
有利于根的分化
生长素
细胞分裂素：
<
有利于芽的分化，抑制根的分化
生长素
细胞分裂素：
＝
促进愈伤组织生长
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响
〔4〕pH、温度、光照
，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h
二、实验操作
〔一〕制备MS固体培养基:
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备
1、配置各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量
2、配置培养基
分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml
① 配制培养液
② 调PH
③培养基的分装
由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素
3、灭菌
分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝
〔二〕外植体消毒
2、消毒
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
② 酒精处理
用无菌吸水纸吸干外植体外表的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗
③消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体外表的水分，％的***化***溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
〔三〕接种
污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟
1、接种室消毒
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种本卷须知
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件
③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
〔四〕培养
锥形瓶放在无菌培养箱中，培养期间定期消毒。温度控制在18～２２℃，每日日光灯光照１２小时．
〔五〕移栽
移栽生根的菊花试管苗之前，应先翻开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日
1、翻开封口膜
2、清洗转移
用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间
3、移栽 幼苗长壮后，移栽到土壤中
〔六〕