文档介绍：栀翘生肌软膏无菌检查方法学探讨【摘要】目的: 建立栀翘生肌软膏的无菌检查方法。方法: 按照《中国药典》 2010 年版附录的要求, 采用薄膜过滤法进行无菌检查, 冲洗液用量为每筒 300ml ,通过接种 6 株阳性菌进行方法学验证。结果: 6 株阳性菌在试验组与阳性对照组均生长良好。结论: 本法可消除栀翘生肌软膏的抑菌作用,适用于该制剂的无菌检查。【关键词】栀翘生肌软膏无菌检查方法学验证栀翘生肌软膏具有清热解毒、活血化瘀、去腐生肌的作用, 适用于烧伤、烫伤、溃疡、褥疮、痔疮及手足干裂, 其对于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。根据《中国药典》要求[1] , 栀翘生肌软膏应进行无菌检查并建立无菌检查方法验证。本文按照《中国药典》要求, 采用薄膜过滤法进行无菌检查方法验证[2] ,建立栀翘生肌软膏的无菌检查标准方法。 1 试验材料与仪器(1 )供试品:栀翘生肌软膏,批号 130526 ,济南市卫生科技交流服务中心。(2 )培养基:营养肉汤培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、硫乙醇酸盐流体培养基, 氯化钠- 蛋白胨缓冲液,均购自北京三药科技开发公司; % 无菌氯化钠溶液按《中国药典》 2010 年版附录中有关规定进行配置、分装和灭菌。(3 )验证实验用菌种(第 4代)) :大肠埃希菌[ (B) 44 102] 、金黄色葡萄球菌[ (B) 26 0003] 、枯草芽孢杆菌[ (B) 63 501] 、生孢梭菌[ (B) 64 941] 、白色念珠菌[ (F) 98 001] 、黑曲霉[ (F) 98 003] ,均购自中国食品药品检定研究院。(4 )仪器:高压蒸汽灭菌器,电子天平,生物安全柜,无菌检测隔离器,集菌培养器,生化培养箱。 2 方法(1 )菌液的制备:取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、大肠埃希菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中, 30~ 35℃培养 24小时, 取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中, 23~ 28℃培养 24 小时。上述培养物用 % 的无菌氯化钠溶液制成小于 100cfu/ml 的菌悬液, 计数, 备用; 另将黑曲霉孢子悬液用 % 无菌氯化钠溶液制成小于 100cfu/ml ,计数,备用。(2) 供试液制备: 取栀翘生肌软膏 10盒, 每盒以无菌操作方式称取 1g, 加至含 20ml 无菌十四烷酸异丙酯的容器中, 充分振摇使供试品溶解, 然后加入 无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液 200ml , 振摇 5~ 10 分钟, 萃取, 静置,使油水明显分层,取其水层作为供试液。(3) 方法验证试验组:取“ ”项下供试液按薄膜过滤法过滤至集菌培养器中,每个滤筒用 300ml 氯化钠- 蛋白胨缓冲液分三次冲洗滤膜,冲洗后加相应培养基 100ml ,然后分别加入小于 100cfu/ml 的相应菌液至滤筒, 硫乙醇酸盐流体培养基置 30~ 35℃培养, 改良马丁培养基置 23~ 28℃培养,逐日观察其结果。(4) 方法验证阳性对照组: 不加供试品, 直接用 氯化钠- 蛋白胨缓冲液,冲洗程序和冲洗量、加培养基、加阳性菌均与“ 方法验证试验组”项下方法相同。与试验组在相同条件下培养, 并逐日观察其结果。(5) 供试品的无菌检查:取“