实验大肠杆菌的培养和分离课件PPT.pptx

文档介绍：微生物
实验大肠杆菌的培养和分离专家讲座
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单细胞原核，分支状菌丝（基内~、气生~）
放线菌
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单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见，含有一定形态结微生物
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单细胞原核，分支状菌丝（基内~、气生~）
放线菌
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单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见，含有一定形态结构子细胞群体（种群）
菌落是判定菌种主要依据
菌落
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芽孢：细菌休眠体
芽孢
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结构
异养型，兼性厌氧型，革兰氏阴性(红色)(G-)
物质(元素)组成：C H O N P S…
大肠杆菌
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按照微生物对营养物质不一样需求，配制出供其生长繁殖营养基质。
培养基类型
液体培养基
固体培养基
凝固剂
琼脂
扩大培养，工业生产
分离纯化，判定菌种，计数，保藏
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成份
作用
主要起源
碳源
主要作能源物质
无机碳(CO2)
或有机碳(糖类)
氮源
合成含N类化合物
N2，NH3，铵，***盐
尿素，牛肉膏，蛋白胨
无机盐
调整渗透压等
水
生长因子
调整促生长
维生素，AA，碱基等
培养基成份
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消毒：较为温和方法，如酒精 注：消毒不能杀死芽孢
灭菌：强烈，全部，完全无菌
灭菌消毒技术是微生物相关工作中最普通也是最主要技术。
无菌技术
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1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min
2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃下煮15min（牛奶）
3、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;***气消毒水源
4、紫外线消毒（空气）
(1)惯用消毒方法：
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(2)惯用灭菌方法：
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：
160-170 ℃下加热
1-2h
3、高压蒸汽灭菌：1kg/cm2、121 ℃下维持15分.
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称量-计算-溶化-灭菌-倒平板
灭菌：加上封口膜，用牛皮纸包好放在高压蒸汽灭菌锅中灭菌，1Kg压力灭菌15Min
步骤一：制备LB培养基(液)
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倒平板
步骤一：制备LB培养基(液)
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紫外灯，过滤风，酒精灯，酒精棉球
在火焰旁右手3指拿锥形瓶，2指拿封口膜
使锥形瓶瓶口快速经过火焰
左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖
待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置
倒平板过程总结
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从大肠杆菌斜面→锥形瓶中液体培养基
接种好后在37度摇床振荡培养12h
工具：接种环在接种前要灭菌
步骤二：大肠杆菌扩大培养
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分离方法：平板划线分离法
原理：经过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作，将聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后，能够分离到由一个细胞繁殖而来肉眼可见子细胞群体，这就是菌落。
只能蘸一次、再次划线从上次末端开始、划好倒置培养1-2天、划线末端出现不连续单个菌落
步骤三：大肠杆菌分离纯化
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平板划线接种
灼烧接种环
冷却
划线
（第一区域）
蘸取菌液
灼烧接种环
冷却
划线
（第二区域）
灼烧接种环
冷却
划线
（第三区域）
灼烧接种环
冷却
划线
（第四区域）
灼烧接种环
冷却
划线
（第五区域）
灼烧接种环
平板倒置放置培养
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第一区域
第二区域
第三区域
第四区域
第五区域
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？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？
操作第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物
每次划线前