文档介绍：----
----
红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验
流感病毒外表的血凝素〔HA〕蛋白，含有识别和结合宿主细胞
外表受体的构造，能使一些特定的红细胞发生凝集现象。当红细胞和
病毒按适当的比例混合后，由于病毒的作用使红细胞发生凝集，此离心机转速
稍有不同〕，弃上清。
3〕参加等量的PBS缓冲液洗涤，充分混匀，离心5min〔转
速同上〕，弃上清。PBS缓冲液洗涤三次。最后一次洗涤后，
离心10min〔转速同上〕，弃上清。
4〕吸出适当体积的红细胞，用PBS缓冲液配制成工作浓度
为1%红细胞悬液。

〔1〕在微量血凝板的第2~12列参加50μLPB缓S冲液。
〔2〕在第一列〔A1~G1〕中参加100μL病毒悬液。
----
----
〔3〕H1参加100μLPB，S作为红细胞阴性对照。
〔4〕从第一列各孔吸50μL病毒液，由第1列至第12列做2倍系
列稀释，最后一列每孔弃去50μL。
〔5〕在每孔中参加50μL红细胞悬液，轻拍血凝板，充分混匀。
〔6〕室温孵育，鸡和火鸡红细胞静置25-30min后观察结果，
人“O〞型和豚鼠红细胞45-60min后观察结果，并记录。

引起全部红细胞凝集为完全凝集，以“+记〞录；只有局部红细胞
凝集记录为“+-/〞；无凝集记录“-〞。血凝滴度的判定以出现完全凝集
的最高稀释度为终点，其稀释度的倒数即为病毒的血凝滴度。

病毒稀释度
1:1:1:1:1:11:31:61:121:251:511:1021:204
124862486248
HA滴
度
123456789101112
A++----------2
B++++--------8
C+++++-------16
D++++++------32
E+++++++-----64
F++++++++----128
G++++++++++++≥2048
H------------＜1

〔1〕一个凝集单位指能引起等量的标准化的红细胞凝集的
----
----
病毒量。进展红细胞凝集抑制试验时一般用4个血凝单位的病
毒量。
〔2〕制备4个单位血凝抗原时，首先计算出红细胞凝集抑制
试验所需的病毒抗原的总量。如每种血清做8孔稀释，每孔用
抗原25μL，。根据标准抗血清的
份数计算出实验所需病毒抗原总量。
〔3〕其次，计算出病毒稀释度。用病毒的HA滴度除以8，得
到的商即为配置4个血凝单位所需的稀释度。如，某病毒的HA
滴度为64，除以8等于8，那么1:8〔1mL病毒液加7mLPBS缓冲液〕
稀释该病毒即可得到4个血凝单位的抗原。
注：红细胞凝集抑制试验中所用的4个血凝单位是指每25μL病
毒液中含有4个血凝单位〔等于50μL病毒液中含有8个血凝单位〕。
，4个血凝单位配置对照表
HA滴度病毒液(μL)PBS(μL)
16800800
324001200
642001400
1281001500
256501550
512251575