文档介绍：实验八微生物的接种技术及分离纯化
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1．掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术。 2．学****平板菌落计数的基本原理和方法
一、目的要求
第二页，课件共21页
实验原理
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1．掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术。 2．学****平板菌落计数的基本原理和方法
一、目的要求
第二页，课件共21页
实验原理
。
本实验采用平板分离法：
1)选择合适的选择培养基。
2)通过稀释倒平板和平板划线等技术得到单
个菌落。
，取一定量的稀释液接种在平板上，经过培养，平板上出现单个菌落，即为一个菌落形成单位（colony-forming units,cfu） 。
第三页，课件共21页
第四页，课件共21页
吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法分别吸取10－5、10－6、 10－，加在已制好的平板培养基上。
涂板 用玻璃刮刀将稀释液在培养基上充分混匀铺平，倒置于恒温箱培养。
计算出每克土壤中细菌的数量。 即用某一培养皿内的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得。
挑取单个菌落，进行划线分离。
微生物的分离—平板涂布法
第五页，课件共21页
第六页，课件共21页
微生物的分离—平板倾注法
吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法分别吸取10－4、10－5 、 10－-1mL，加在空培养皿中。
混和摇匀 水平轻轻转动培养皿，使菌液、培养基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后倒置于恒温培养箱培养。
计算出每克土壤中放线菌的数量。
挑取单个菌落，进行划线分离。
第七页，课件共21页
微生物的分离—平板划线法
制成平板。
凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10－1）在平板上划线。 ：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。 ：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环，先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿约60度角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。
挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，最后得到纯培养。
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第九页，课件共21页
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实验材料
样品：新鲜土壤。
培养基：灭菌的淀粉琼脂培养基、牛肉膏蛋白胨培养基。
无菌水：带有玻璃珠装有99mL无菌水三角瓶、。
其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。
第十一页，课件共21页
实验步骤
1．制备土壤稀释液 称取土样1g，放入盛有99ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇混匀。
2．10倍梯度稀释 ，，以次类推制成10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的溶液。
一、土壤中细菌的分离、纯化及菌落计数（6皿/组）
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3．涂布 选择3个连续梯度（10-4、10-5、10-6），每个稀释度涂布2个平板，，用无菌玻棒涂布均匀。
4．培养 37℃倒置培养过夜。
5．计数并检验产胞外淀粉酶的菌株
总菌落计数完后，将平板内滴加1-2ml卢戈氏碘液，菌落周围产生透明圈的菌落就是产胞外淀粉酶的菌株，观察并计数
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二、划线分离
平板的制作（牛肉膏蛋白胨培养基）
将15ml培养基无菌条件下倒平板，待其凝固后备用（4皿/组）
划线分离：
取枯草杆菌和金黄色葡萄球菌混合菌悬液一环，采用连续划线或分区划线的方法分离单菌落
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（1）计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。 若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数×2 （2）选择平均菌落数在30～300之间的平板 只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。 （3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌