文档介绍：临床基因扩增检验的质量保证
临床基因扩增检验的质量保证
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定 义
质量确保(Quality Assurance,QA) 为一产品或服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要有计划和系统办法。
评价方法：包含肉眼观察,显微镜下观察和化学分析等。
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采样及运输容器
标本采集材料如棉签应为一次性使用；
采样及运输容器应为密闭一次性无菌装置；
采样所用防腐剂、抗凝剂及相关试剂材料不应对核酸扩增及检测过程造成干扰。
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标本采集中防污染
采集中要尤其注意污染，预防混入操作者头发、表皮细胞、痰液等；
如使用玻璃器皿，必须经高压灭菌，以使可能存在RNase失活。
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标本保留
靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶作用而快速降解，所以标本保留对于核酸扩增测定有效性极为主要。
使用GITC作为稳定剂保留标本，标本可在室温下稳定约7天。
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标本保留
临床体液标本长久保留应在-70℃下。
如为提取核酸后用于DNA扩增分析样本，可于10 mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(～)缓冲液中4 ℃下保留。
用于RNA扩增分析样本，则应于上述缓冲液中-80℃或液氮下保留。
核酸乙醇沉淀物则可于-20℃下保留。
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标本运输
样本一经采集，则应尽可能快送至检测试验室。
样本中如加入了适当稳定剂,如用于RNA测定加入GITC血清(浆)样本和用于DNA测定EDTA抗凝血等,则可在室温下运输或邮寄。
试验室应依据待测靶核酸特征，对各种临床样本运输条件作出对应要求。
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临床基因扩增检验室内质量控制
测定前质量控制
核酸样本制备及其质量控制
统计学质量控制
质量控制评价
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测定前质量控制
试验室设施、仪器设备及管理
理想试剂和操作方法
人员培训
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试验室设施、仪器设备及管理
临床基因扩增检验试验室应有充分合理空间、良好照明和空调设备 ；
试验室仪器设备应保养良好，试验用具要到达对应要求。加样器校准？带滤塞吸头使用及质检？离心机？热循环仪？水浴箱和/或恒温干浴仪？酶标仪和洗板机？
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基因扩增仪器设备质控
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带滤塞吸头使用及质检
首先制备一个含1～2%甘油及色素（如***橙）水溶液，假如吸头最大致积为100μl，则将加样器吸收体积调至110～120μl，再套上吸头后吸收上述有色液体。假如吸头质量好，则有色液体不应出现在滤塞之上，不然说明滤塞不严。
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带滤塞吸头使用及质检
用试验来检验带滤塞吸头质量：先纯化制备数份强阳性和数份阴性核酸标本，然后将加样器吸收量设至扩增加样所需体积，使用待评价带滤塞吸头对一份强阳性样本往返吸收10次（模拟10份阳性样本吸收），将最终一次吸收液加至一含扩增反应液管中，之后，换一个新吸头，连续吸收10份阴性样本分别至10个扩增反应管中，此过程重复3～5次，最终对每一管按所用试剂方法进行扩增检测。强阳性样本应为强阳性，阳性弱或出现阴性则说明吸头可能含有扩增抑制物。全部阴性样本应为阴性，出现阳性则表明吸头不能有效地预防气溶胶对加样器污染。
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核酸提取用离心管质检
离心管PCR抑制物质检
其它
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扩增仪孔间温度重复性和均一性检测方法
一是使用一个热电偶探针、微伏转换器和自动图示统计仪组成扩增加热模块孔内温度监测统计系统，当孔间温度变异超出1℃时，其可测出来。
详细做法是将装有TE缓冲液并上加石蜡油扩增反应管放置于扩增仪各孔中，热电偶探针透过扩增反应管盖插至缓冲液中，然后按程序进行一个常规PCR扩增，加热模块如为96孔，则最少要测定12孔不一样位置孔内温度，在整个扩增过程中，可移动热电偶探针至上述不一样孔中监测温度，但每一孔内温度监测最少要有一个扩增周期。
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扩增仪孔间温度重复性和均一性检测方法
第二种方法并非直接测定孔内温度，而是经过扩增功效来间接获知孔间均一性，即将加有一已知含一定浓度阳性质控样本扩增反应管置于扩增仪各孔中按常规进行扩增检测，观察结果一致性程度，假如有某一个或几个孔结果有问题，则应确定这一个或几个孔是否会重复性地得到假阴性结果，假如是，则表明对应