文档介绍：微生物学实验
微生物学实验
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微生物试验意义、研究进展和试验内容
一、研究内容
研究微生物形态、结构、生理生化
遗传变异、微生物与其它生物、
与自然界之间关系
1. 微生物学实验
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油镜使用原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜经过玻片与镜头之间空气时，因为空气与玻片密度不一样，使光线受到波折，发生散射，降低了视野照明度。若中间介质是一层油（其折射率与玻片相近），则几乎不发生折射，增加了视野进光量，从而使物象愈加清楚。
依据公式D=λ/2n·sin(α/2 ) ，增大分母，使得D值减小，分辨率增大。
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,以免损坏。
，不能用手指或粗布，以确保光洁度
，必须依次用低、中、高倍镜，最终用油镜。当目视接目镜时，尤其在使用油镜时，切不可使用粗调整器，以免压碎玻片或损伤镜面。
，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。
，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。
显微镜保养和使用中注意事项
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油镜使用
待后边演示
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二、试验原理2
细菌单染色
细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后菌体与背景形成显著色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
染色前必须固定细菌，其目标是：
一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。
二是增加其对染料亲和力。常见有加热和化学固定两种方法。固定时尽可能维持细胞原有形态。
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三、试验材料
奥林巴斯双筒普通光学显微镜
沙黄染色液。
培养24h大肠杆菌（)
载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。
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四、试验步骤
一、制作大肠杆菌观察片
现场演示
无菌操作
涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检
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二、显微操作
现场演示
：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍观察
：高倍镜下找到清楚物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。
：另换新片，必须从第三条开始操作。
：观察完成，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上油，然后再用擦镜纸沾取少许二甲苯擦去残留油，最终用擦镜纸擦去残留二甲苯，后将镜体全部复原。
注意：油镜使用完成后一定要用二甲苯擦拭镜头
三、口腔微生物观察
，用牙签取牙垢少许与水滴充分混匀，涂成薄膜。
，按单染色法步骤，进行固定、染色、水洗，干燥后镜检。
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五、试验结果
用油镜观察大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和口腔微生物染色标本，并绘图。
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六、问题与讨论
？固定加热时间过长会怎样？
，为何必须用香柏油？
，为何先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？
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内容回顾
一、原理
显微成像原理
油镜使用原理
单染色原理
二、技术和方法
无菌操作技术
制片和单染色方法
显微镜使用方法
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此次试验课结束 请确保油镜头擦拭洁净！ 请第一排同学留下值日 下周再见！
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用于生物染色染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料离子带正电荷，能和带负电荷物质结合。因细菌蛋电质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性溶液中时常带负电荷，所以通常采取碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等)使其着色。酸性染料离子带负电荷，能与带正电荷物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，所以易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前二者结合物又称复合染料．如伊红美蓝、伊红天青等。
试验二 细菌染色法及微生物观察
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简单染色法是只用一个染料使细菌着色以显示其形态方法难于区分细菌细胞结构。
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革兰氏染色法法可将全部细菌区分为革兰氏阳性菌(G－)和革兰氏阴性菌(G＋)两大类，是细菌学上是常见判别染色法。该染色法所以能将细菌分为G－菌和G＋菌，是由这两类菌细胞壁结构和成份不一样所决定。G－菌细胞壁中含有较多易被乙醇溶解类脂质，而且