文档介绍：核酸的分离与检测
核酸的分离与检测
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从哪儿提取（Where）？
怎么提取（How）？
提到什么程度（What）？
会出现什么问题（Questions）？怎样处理（Solution）？
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核聚，将核酸释放出来；
3．对RNase、DNase有一定抑制作用。
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关键试剂作用
核酸制备中常见蛋白质变性剂蛋白质变性剂作用：
、沉淀，从核酸提取液中分离除去，以防造成蛋白污染。
，故可使核糖体解聚释放出核酸。
。
如：苯酚、***仿、盐酸胍、DEPC
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关键试剂作用
核酸制备中常见酶

DNase
RNase
蛋白酶K
溶菌酶
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核酸个别特征
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核酸个别特征
存在形式
pH值影响
盐影响
温度影响
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RNA和核苷酸纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样纤维状物。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，普通都溶于水，不溶于乙醇、***仿等有机溶剂，它们钠盐比游离酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。
天然状态DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。要从细胞中提取DNA 时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中糖，RNA 及无机离子等，从中分离DNA 。
—— removal of Pr
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DNA在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA两条互补链不会完全分离，当以pH ，变性质粒DNA完全复性，而染色体DNA不能复性而形成缠连网状结构
——碱变性法（for plasmid DNA）
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DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解， mol/L***化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度1%，伴随盐浓度增加溶解度也增加，至1mol/L***化钠中溶解度很大，比纯水高2倍。
RNP在盐溶液中溶解度受盐浓度影响较小，***化钠中溶解度较大。所以，在提取时，常见此法分离这两种核蛋白。盐溶液中溶解度受盐浓度影响而不一样。
——浓盐法
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高温变性
低温复性
——沸水浴法（for plasmid DNA）
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核酸常见提取方法
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常见DNA提取方法
浓盐法
阴离子去污剂法
苯酚抽提法
水抽提法
沸水浴法
碱变性法
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1. 浓盐法
原理：利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不一样，将二者分离；
常见方法：用1M ***化钠提取***化钠抽提,得到DNP粘液与含有少许辛醇***仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及***仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来（ MNaCL液重复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按***仿---异醇法除去蛋白）。
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1. 浓盐法
注意
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有利于蛋白质与DNA 分离。
在提取过程中为抑制组织中DNase对DNA 降解作用,在***,,并称SSC溶液,提取DNA.
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2. 阴离子去污剂法
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,能够直接从生物材料中提取DNA。因为细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常见阴离子去污剂提取DNA.
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3. 苯酚抽提法
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase降解作用。
用苯酚处理匀浆液时,因为蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相同相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，屡