文档介绍：菌落总数与大肠菌群数测定
菌落总数与大肠菌群数测定
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主要内容
水样采集与送检
菌落总数测定
大肠菌群测定
MPN法原理（拓展内容）
菌落总数与大肠菌群数测定
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水样采集和送检
采样瓶：洗净、包扎、灭菌
45 ℃，无菌，倾注，15ml
（2）选产酸产气发酵管
（3）接种至伊红美蓝平板
分区划线法
（4）培养： 37℃，24h
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分离培养
器材与试剂
初发酵结果（4只发酵管）、酒精灯、接种环、伊红美兰平板培养基
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分区划线法
第一区划线
灭菌接种环
第二区划线
灭菌接种环
第三区划线
灭菌接种环
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分区划线法
操作关键点
-40°角
-3条线
“面”而不是“弧”在平板上滑动
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大肠菌群数测定
试验步骤
：
（5）菌落特征：
深紫黑色、有金属光泽
紫黑色、无或略有金属光泽
淡紫红色、中心颜色深
（6）革兰染色、镜检：选特征菌落
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革兰染色法
器材与试剂
结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、酸性复红、生理盐水、酒精灯、载玻片、滤纸
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革兰染色法
涂片：接种环，挑取菌落，
生理盐水一滴，涂匀
热固定：经过火焰若干次
初染：结晶紫一滴，1min，水洗
媒染：卢戈碘液一滴，1min，水洗
脱色：95%乙醇，30s或至无色为止
复染：复红一滴，30s
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涂片
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热固定
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初染
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媒染
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脱色
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复染
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革兰氏染色阴性
革兰氏染色阳性
革兰染色法
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复发酵
器材与试剂
培养24小时后伊红美兰平板、酒精灯、接种环、复发酵管
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大肠菌群数测定
试验步骤
（1）选取判定为无芽孢G-杆菌菌落1-3个
（2）接种至10ml乳糖蛋白胨培养液
（3）培养：37℃，24h
（4）观察指标：产酸，产气
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液体接种
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复发酵
复发酵阳性结果，培养基变成黄色，小倒管内有气体产生
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大肠菌群数测定
注意事项：
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MPN法原理
MPN法（Most Probable Number Method）
目标：对某种细菌进行选择性计数
关键思想：泊松分布
实施方法：屡次稀释直至无菌，每个稀释度分别接种若干培养管，依据阳性管数估算MPN值
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MPN法原理
MPN法（Most Probable Number Method）
: P(x=k)=e-x ×xk/k!
x:细菌浓度，k:进入发酵管细菌数
，令接种水样量为Vi，阳性管数为Pi，阴性管数为Qi，则该检验结果发生概率为：
其中C为常系数
V为总水样量，x为细菌个数
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MPN法原理
(x)max，XMPN
(x)为单极值函数，令dy/dx=0,即
，得x=MPN
，普通采取数值法求近似解
。
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饮用水卫生标准
菌落总数：不超出100 CFU/ml
大肠菌群：不得检出
引自GB/T5750