文档介绍：第四组液相色谱法测定对位红
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目前对于食品中的对位红测定方法主要采用薄层色谱法·“液相色谱分析法”列和液相色谱／质谱分析法等，其中法定检测方法包括欧盟委员会规定的辣椒粉中苏丹红测定的高效液相色谱法测定和我此课件共19页哦
优点：操作简单，填充完凝胶柱后可重复使用，实际用量少于欧盟及国标方法，并且用淋洗液替代剧毒而又昂贵的乙***进行提取，自制凝胶柱净化富集避免了欧盟方法用乙***直接萃取进样对色谱柱寿命的影响及杂质峰的干扰，也避免了国标方法中采用氧化铝柱净化活度难以控制的麻烦，一次进样可同时检测食品中对位红、苏丹红的含量
应用范围：食品及调味品中对位红、苏丹红的检测
仪器及试剂：Agilent 1100 高效液相色谱仪(含二极管阵列检测器、柱温箱、自动进样器)层析柱< 1. 6 cm ×50 cm ,填充Bio2Beads S2X3凝胶。苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及对位红标准品,纯度均大于95 % ,配制时用少量三***甲烷溶解,乙***定容为0. 500 0 g ·L - 1 储备液(按实际含量折算) ,使用时用乙***稀释至所需浓度。
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色谱条件
色谱柱Zorbax SB2C18 ( 4. 6 mm ×250 mm ,5μm) ;流动相:乙***(A) + 酸性水溶液(用乙酸调至约p H 4. 0) ; 洗脱程序: 0 ～ 9 min A 90 %; 9 ～12 min ;A 线性变化到100 % ,保持5 min 后回到初始比例;流速1. 0 mL ·min - 1 ;柱温35 ℃;进样量20μL ;二极管陈列检测器,程序可变波长见表1 。
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简介：在推荐参考方法的基础上,对分离和色谱条件加以改进、优化、选择,用于几种含对位红食品采用拟定的方案进行分离检测。结果:方法的检出限为011μg/ml,标准曲线的线性相关系数( r) 019999,在014-116μg/ml添加水平间,加标的回收率95% ～105% , RSD 019% ～911%。改进的方法准确可靠,检测效率高,具有实际应用意义。
应用：测定食品中对位红的残留量
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仪器、试剂及色谱条件
仪器设备 Waters 2695 型高效液相色谱仪。Waters、996型二极管阵列紫外检测器。MilliQ p lus型超纯水器,美国Millipore公司产品。超声波清洗器。
试剂 对位红标准品(95% ,Acros Organics, USA) ;乙***(分析纯和色谱纯) 。
色谱条件
色谱柱,MERCK L ichrocart 250 - 4 L ichrospher100 RP -
18, 4 ×250 mm, 5μm; 流动相: 水+乙***( 5 + 95 ) ; 流速:
110 ml/min;检测波长: 485 nm;进样量: 10μl。
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.分光光度法--紫外可见分光光度计
应用范围：
根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长虽ax和摩尔吸收系数是
检定物质的常用物理参数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。在国内外的药
典中，已将众多的药物紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入其中，为药
物分析提供了很好的手段。
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫
外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标
样，也可以和现成的标 准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度
高，且测定条件要相同。
实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断
化合物在不 同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂 。
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简介
在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与众不同波长相对应的吸收强度。如以波长（λ）为横坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法。
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三、对位红检测方案的确定
结论：选用高效液相色谱法
理由：①对位红的熔点为248-252度，很难汽化，明显不能用气相色谱法来进行检测。
②以高效液相色谱法的