文档介绍：实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验七 动物组织中核酸的提取与鉴定
【原 理】
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验七 动物组织中核酸的提取与鉴定
【原 理】
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。核蛋白可被三***醋酸沉淀,再用95％乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质,然后用10％NaCl溶液提取出核酸的钠盐,加入醇可使核酸钠沉淀析出。
先用水由动物肝中提出核蛋白,再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂,并用***抽提去蛋白质及其它杂质,最后用乙醇将核酸沉淀。
核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。有机碱(嘌岭、嘧啶)与戊糖(核糖、脱氧核糖)。
此三类化合物可用下列方法鉴定之。
1、磷酸:能与钼酸试剂作用生成磷钼酸,后者在还原剂的作用下。还原成兰色的钼兰。常用的还原剂有氨基苯磺酸、***化亚锡,维生素C等。
H3PO4＋12H2MoO4→H3PO4·12MoO3 + 12H2O
H3PO4·12MoO3 H3PO4·6MoO3 ·3Mo2O5
2、嘌呤碱:能与苦味酸作用形成针状结晶
3、戊糖:
(1)核糖:经与强酸(盐酸与硫酸)共热生成糠醛,后者可与3;5二羟***苯缩合成绿色化合物。
(2)脱氧核糖:在强酸中加热,可生成ω—羟基γ—***基戊醛,后者再与二苯***作用生成一蓝色化合物。
上述二反应如下
【操 作】
(一)核酸提取
l、用酚提取法:
(1)取小白鼠一只,断头处死,剖腹取肝,置于研钵中,加入玻璃少许,研磨至糊状后,加入蒸馏水3ml,继续研磨约三分钟。
(2)于该研钵中再加酚液5ml,研磨约十分钟后,倒入—-圆底离心管中,离心5分钟(约2000转/分钟)。
(3)用毛细管将上液吸出,置于一圆底离心管中,加***2ml,用拇指将管口按住,用力振摇1—2分钟(提出酚),离心5分钟后,用毛细滴管吸取全部下层液于一圆底离心管中。
(4)于该管中加入95％乙醇2ml,用玻棒搅拌约2分钟,离心3分钟,,沉淀部分即为核酸。
2、用三***醋酸提取法
(1)杀兔;取肝,称重,按每克肝脏4ml比例加入1％三***醋酸,制成肝匀浆。每组量取肝匀浆5ml于带塞离心管中,3000转／分离心5分钟。
(2)将离心后的上清液倾去,于沉淀中加95％乙醇5ml充分混匀,在水浴中加热至沸2分钟,注意酒精沸腾后将火关小,避免酒精蒸汽燃烧。冷却后离心。
(3)倾去上层乙醇液。于沉淀中再加入10％NaCI溶液4ml,置沸水浴中8分钟,并用玻棒不断搅拌,取出;冷却后再离心,
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
(4)将上清液倾入另一离心管中,再离心一次,除去可能存在的微量残渣,将上清液倒入一试管。
取等量95％的乙醇,逐滴加入到上清液中,即可见白色沉淀逐渐出现,静置10分钟后。将其内容物摇匀后倒入一圆底离心管中,离心5分钟,将上液倾去,所