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醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白.ppt

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醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白.ppt

上传人:文库新人 2022/2/18 文件大小:790 KB

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醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白.ppt

文档介绍

文档介绍:醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白
第1页,此课件共12页哦
二、实验仪器
1、  牛血清
2、  醋酸纤维薄膜
3、  镊子
4、  电泳仪
5、  电泳槽
6、  盖玻片
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三、醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白
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二、实验仪器
1、  牛血清
2、  醋酸纤维薄膜
3、  镊子
4、  电泳仪
5、  电泳槽
6、  盖玻片
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三、实验试剂
1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液(离子强度,):,溶于蒸馏水并稀释至1000ml。用pH计较正后使用。
2、 染色液:,甲醇50ml,冰乙酸10ml,蒸馏水40ml混匀即可。
3、 漂洗液:95%乙醇45ml,冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀即可。
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四、试验步骤
1、准备:用镊子取薄膜一条,浸入缓冲液中,完全浸透后(大约3-5分钟),用镊子取出,将无光泽的一面向上,平放在干净滤纸上,将滤纸对折,吸取多余的缓冲液(注意不要吸的太干)。
2、点样:取盖玻片一块,用玻璃棒将血清均匀的涂在盖玻片的一端面上,直直的在薄膜一端1/3处点样。
3、电泳:将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上,无光泽面要向下放置,点样端放在阴极,进行电泳。电泳条件:电压90-110V,-,通电60分钟。
4、 染色:电泳完毕,将薄膜浸入染色液(回收)中10分钟,进行染色。
5、漂洗:染色完毕,将薄膜取出,放入漂洗液中漂洗至背景无色,在浸入蒸馏水中。
6、图谱观察:观察图谱,将各种血清蛋白质按实际比例大小绘于实验报告纸上。
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注意事项
请带试验的老师试验结束后,将镊子回收。
醋酸纤维薄膜在光下面能明显区分有光泽面和无光泽面。
电泳槽中间为正极,两端为负极。
染色液请用完后回收到原来的试剂瓶中。
漂洗薄膜时,请做到“少量多漂”,即用少量的漂洗液去漂洗薄膜,多漂几次,这样既不浪费漂洗液,还达到了漂洗的效果。
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实验十二 维生素C的定量测定(2,6-二***靛酚滴定法)
一、原理
维生素c又称为抗坏血酸,其还原型能还原染料2,6-二***靛酚钠盐,本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中,2,6-二***靛酚成红色,被还原后变为无色。
因此可用2,6-二***靛酚滴定样品中含有的维生素C,当样品中的维生素C被完全还原后,在滴加过量的2,6-二***靛酚,溶液变为淡红色,即为终点。
如无其他杂质干扰,则样品液所还原的2,6-二***靛酚的量与样品中所含有维生素C的量成正比。
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二、实验仪器
新鲜水果
吸管
容量瓶
滴定装置
锥形瓶
研钵
漏斗
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三、实验试剂
1、2%草酸溶液:草酸2g,溶于100ml蒸馏水。
2、1%草酸溶液:草酸1g,溶于100ml蒸馏水。
3、标准维生素C液:,溶于1%草酸溶液,并稀释至100ml,贮于棕色瓶中,冷藏,最好临用时配制。.
4、%2,6-二***靛酚溶液:称取500mg2,6-二***靛酚溶于300ml含有104mg碳酸氢钠的热水中,冷却,加蒸馏水并稀释至500ml,滤去不溶物,贮于棕色瓶中,冷藏。
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四、实验步骤

将水果用水洗干净,用滤纸吸取表面水分。
,加2%草酸试剂10ml置研钵中研成浆状。
直接将浆状物,倒入50ml容量瓶中,用2%草酸溶液稀释并定容,混匀,静止10分钟,过滤(最初数毫升滤液弃去),滤液备用。
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1) 标准液的滴定:,加9ml1%草酸溶液,用2,6-二***靛酚滴定至淡红色。滴定终点要保持15秒钟。有所用2,6-二***靛酚的体积算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸。
2) 样品液的滴定:准确吸取滤液两份,每份10ml,分别放入两个100ml锥形瓶中,滴定方法同上。( 2,6-二***靛酚用完后,请回收回原来的试剂瓶中)
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五、结果计算
按下式计算100mg样品中含抗坏血酸的毫克数:
m=V*T/W*100
V=滴定时所用染料ml数
T=每毫升染料氧化抗坏血酸质量
W=10ml样液相当于含样品的质量数
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注意事项
1、滴定过程宜迅速,一般不超过2min。
2、滴定所用染料一般不应少于1ml或多于4ml,如果