文档介绍：关于蛋白质组与蛋白质组学
第一页，本课件共有49页
蛋白质组学
DNA
mRNA
蛋白质
转录
翻译
基因
蛋白质
细胞特异性基因表达
生理状态
蛋白质相互作用
温度
应激状态
培养条件
药物作用
免疫共沉淀 (co-IP)技术
基于与蛋白质X的生理性相互作用，如果用蛋白X的抗体免疫沉淀X，则蛋白质Y也可能沉淀下来。Y的这种免疫沉淀被称为免疫共沉淀(co-immunocipitation, Co-IP)，此法最常用于测定两种目标蛋白质在体内的结合。
Y
A
B
Y
裂解细胞
免疫共沉淀蛋白质X
第十九页，本课件共有49页
（二）二维凝胶电泳（2-DE)
是目前蛋白质组研究中最有效的分析鉴定技术之一
由两相组成：
第一相：等电聚焦凝胶电泳
根据蛋白质电荷差异
第二相：SDS－聚丙烯酰***凝胶电泳
根据蛋白质分子量差异
二、分析鉴定
第二十页，本课件共有49页
二维双向电泳(2D electrophoresis)
基本原理
基于等电点与分子量分离蛋白质
IEF-focused proteins
SDS-charged proteins in IPG strip
SDS-charged proteins
resolved according to sizes in SDS-PAGE gel
第二十一页，本课件共有49页
2-DE原理示意图
二、分析鉴定
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2-DE分析的基本步骤
蛋白质
溶解
变性
还原
去除蛋白
质杂志
利用不同
pK固定化
电解质可
配置不同
pH范围的
凝胶或利
用商业化
软件设计
第一相电泳：
IPG－IFE
平衡
第二相电泳：
SDS－PAGE
考马斯亮
蓝染色、
银染色、
铜染色
样品制备
IPG胶制备
双相电泳
染色
二、分析鉴定
第二十三页，本课件共有49页
2-DE获得的蛋白质图谱
二、分析鉴定
第二十四页，本课件共有49页
优点：可以同时直观显示数千个蛋白质点；
缺点：耗时，耗力，目前无法自动化；难以分离疏水、具极端分子量
或等电点的蛋白质（如膜受体蛋白、组蛋白等）。
二维双向电泳(2D electrophoresis)
silver staining (~3000 spots)
第二十五页，本课件共有49页
蛋白质染色
考马斯亮蓝染色
银染：灵敏度高；“雪崩”效应；末端封闭
铜染
第二十六页，本课件共有49页
通过2-DE得到的蛋白质分离图谱，需要经过摄像或扫描转换为以像素为基础的、具有不同灰度强弱和一定边界方向的斑点电脑信号。
(三)图像分析技术
二、分析鉴定
第二十七页，本课件共有49页
2-DE图像分析软件包操作过程：
图像采集
斑点检测
背景消减
获得蛋白质相关信息
图像内及图像间的比较
二、分析鉴定
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放射性核素标记亲和标签法
正常细胞
D0亲和标签
病理细胞
D8亲和标签
混合并消化
生物素亲和纯化
液相色谱－质谱联用分析
测量两个不同样品中蛋白质的相对丰度
二、分析鉴定
第二十九页，本课件共有49页
蛋白芯片(protein chip)技术
将一系列“诱饵”蛋白以阵列方式固定在经过特殊处理的底板上，然后将其与待分析的样品杂交，只有那些和“诱饵”结合的蛋白才被保留在芯片上。其实质是酶联免疫吸附测定。
基于蛋白质表面化学及质谱检测的高通量蛋白质分析技术
第三十页，本课件共有49页
蛋白芯片(protein chip)技术
基本方法
蛋白质的结合：未经处理的样品(如血清，尿液等)直接点在芯片
上，根据芯片表面不同的化学或生物特性结合相应的蛋白质；
清洗减少非特异性蛋白(如盐及其它污染物)的结合；
加能量吸收分子(EAM)：EAM能有效的吸收激光的能量，使样品
分子进入气相并得到电离；
用表面增强的激光解吸电离法(SELDI)将保留在芯片上的蛋白质
洗脱下来；
电离的蛋白质可以通过飞行时间质谱仪精确地测定它们的质量；
第三十一页，本课件共有49页
蛋白芯片(protein chip) 技术
从未经提纯的生物或临床样品中直接捕获、检测
和分析蛋白质不需任何标记或加尾
超高的检测灵敏度 (1-50 fmole的蛋白质)
从超小样品体积( µl)到大体积(400µl)
快速获取实验结果
第三十二页，本课件