文档介绍：2013年2月 The Chinese Journal of Process Engineering Feb. 2013收稿日期:2012?10?10,修回日期:2012?12?06 作者简介:徐晓娟(1988?),女,山东省德州市人,硕士研究生,生物工程专业;王云山,通讯联系人,Tel: **********, E-mail: ******@..莽草酸发酵液的快速检测方法徐晓娟1,2, 王自强1,2, 杜英1, 王云山1, 苏志国1(1. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京 100190;2. 中国科学院大学,北京,100049) 摘要:建立了采用高效液相色谱法快速测定发酵液中蔗糖、莽草酸和芳香族氨基酸含量的方法,为微生物发酵生产莽草酸的工艺控制提供便捷. 色谱条件为:Hypersil APS-2色谱柱(5 μm, 250 mm× mm),检测波长215 nm,示差检测器和紫外检测器联用,流动相为pH ***(体积比20:80),柱温30℃, mL/min,进样量10 μL. ,加样回收率为95%~105%,%. 关键词:高效液相色谱;蔗糖;莽草酸;芳香族氨基酸;发酵液中图分类号: 文献标识码:A 文章编号:1009?606X(2013)01?0124?051 前言莽草酸,化学名3,4,5-三羟基-1-环己烯-1-羧酸,主要存在于高等植物和微生物中[1],有一定刺激性[2],有抗炎、镇痛作用,可作为抗禽流感药物磷酸奥司米韦[3?7] (商品名达菲)和抗肿瘤药物二恶霉素[8]、乙二醛酶抑制剂[9]等的合成原料;其在生物合成中也扮演重要角色,是生物体内经由磷酸烯醇式***酸与4-磷酸赤藓糖合成苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸3种芳香族氨基酸的中间产物[10],也是一些次生代谢产物的重要原料. 目前发酵液中莽草酸的检测方法主要有紫外?可见分光光度计法[11]、毛细管电泳法[12]、液相色谱?质谱联用法[13]、气相色谱?质谱联用法[14]等. 培养基中芳香族氨基酸及蔗糖的测定也可采用高效液相色谱法[15,16]、毛细管电泳法[17,18]和质谱法[19]等方法. 其中高效液相色谱法具有样品预处理简单、灵敏度高和分析时间短等优点,已广泛应用于莽草酸、蔗糖和氨基酸的测定. 但这几种物质统一的测定方法尚未见报道,目前生产过程中仍需单独测定各物质的含量. 发酵液中组分的单独测定不仅耗时长,而且样品处理方法各异,操作繁琐. 本研究在高效液相色谱法的基础上联用紫外?示差检测器,建立了一种简便快速的测定方法,可同时分析发酵液中蔗糖、氨基酸及莽草酸的浓度,可缩短检测时间,为莽草酸发酵过程的实时监测提供了便捷. 2 实验材料与试剂化学试剂L-苯丙氨酸(L-Phe)、L-酪氨酸(L-Tyr)、L-色氨酸(L-Trp)、莽草酸(Shikimic acid)均购自美国Sigma公司;色谱纯乙***(美国Fisher公司),蔗