文档介绍：林业科学研究19958(l)73一77FreRrch松材线虫和拟松材线虫不同株系酶电泳的研究胡凯基杨宝君摘要应用聚丙烯酞***凝胶电泳技术对来自国内及日本加拿***国挪威的松材线虫及拟松材线虫株系作酶电泳的初步分析结果表明不同株系的苹果酸脱氢酶及纤维素酶酶谱各不相同超氧化物歧化酶有1条在不同株系中迁移率相同的酶带松材线虫与拟松材线虫在醋酶谱上差异明显但培养于裂褶菌多毛抱和葡萄抱上的来自南京黑松上的同一株系线虫的酷酶谱也显示了明显差异表明了该酶的不稳定性谷氨酸草酞乙酸转氨酶是唯一可区分两种线虫的酶松材线虫只有1条迁移率039的带拟松材线虫只有1条迁移率。51的带可用于两种线虫的生化鉴定对可溶性蛋白质及过氧化物酶的分析未检测到清晰可辨的酶带关链词松材线虫拟松材线虫酶谱电泳松材线虫(BrsPhlh秒Z妒hil(StitBh)Nikl)和拟松材线虫(BmrotuMm污tEda)在形态致病性方面的部分重叠及兼具两种线虫部分特性的中间类型的存在给分类鉴定和实际工作带来很大的困难〔〕对两者分类地位的问题至今仍有不同的看法为此一些研究者转而试图从遗传生化方面阐明其关系DGuian[3]Kiyoh[4]My[5]Hothkin[等先后对一些线虫株系的酶作了研究日本研究人员还试图探讨酶谱与线虫致病性之间的关系Wbs川等研究了DNA探针技术用于鉴定线虫株系并据DNA分析法认为日本的松材线虫有可能来自北美Bolla等还发现两个致病性不同的线虫株系在能量代谢途径上存在差异本文作者利用聚丙烯酞***凝胶电泳技术对来自国内外的13个线虫株系进行了6种酶的电泳分析以期为进一步认识松材线虫和拟松材线虫的生化特性和分类鉴定有所助益1材料及方法11线虫株系松材线虫株系为南黑(南京黑松pithnbrgl’iPl)南马(南京马尾松尸mQssoiLmb)南华(南黑接种华山松尸mdiFh后)广东(深圳马尾松)山东(长岛黑松)STJBBC(加拿大针叶树木削片)S6(日本黑松)拟松材线虫为江西(江西马尾松)四川(四川马尾松)Bpf(法国南欧海松PpitAi)Q1426(加拿大针叶树木削片)Norway(挪威针叶树木削片)线虫均在裂褶菌上保种至试验1993一11一刃5收稿胡凯基助理研究员杨宝君(中国林业科学研究院森林保护研究所北京91)本文为1989~1992年国家科委重点科技项目松材线虫病的研究部分内容74林业科学研究8卷12线虫培养及酶液提取所选线虫株系在长有裂褶菌(&hizoP勿llump)的PDA培养基上扩大繁殖南黑线虫同时还在多毛抱(prltip)和葡萄抱(Br即tiirep)上繁殖漏斗法分离线虫蒸馏水冲洗计数后浓缩加浸提液(4℃)在冰浴上充分研磨离心(100009)15min取上清液作电泳样品对照样品为与线虫等体积的无线虫的培养菌按上述方法提取每电泳样相当于3000一4000条线虫的提取液醋酶则需10000条13电泳为垂直极状聚丙烯酞***凝胶电泳分离胶浓度7写浓缩胶3%纤维素酞凝胶加入02写CMC14染色(l)酷酶坚牢蓝R一一醋酸蔡醋法川(2)苹果酸脱氢酶及超氧化物歧化酶双显色法(3)纤维素酶碘一碘化钾法(4)谷氨酸草酸乙酸转氨酶见文献[9〕(5)过氧化物酶V一联苯***法(6)可溶性蛋白三***乙酸一考马斯亮蓝法2结果21酉旨酶(EtEt)南黑山东江西三个株系具有较复杂的电泳谱并且株系间差异明显(见图1)同