文档介绍：铁皮石斛组织培养方案报告
一、实验目的
认识铁皮石斛培养的方法和步骤，娴熟掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培
养的操作过程。
二、实验器材
超净工作台、高压灭菌锅、转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列；
转接
1）揭去防尘膜，翻开电源、通风和紫外灯，灭菌 15— 20min；
2）关掉紫外，翻开白炽灯，用 75%酒精认真擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、
工作区等处，保证“消毒”彻底；
3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，精选生命力旺盛的植株用于
转接；
4）用无菌剪刀修去多余的根系， “双镊子”法将材料转接于新的培养基中；
5）标明有关日期和品系，转至培养室培养。
注意事项
①操作时，所有用具均不能从“核心工作区” 和开启的培养瓶上面晃过，防备细菌落入而致使污染；
②在翻开材料瓶和培养瓶后，其盖均在酒精灯外焰灼烧 3-5s，瓶口灼烧 5-10s；盖瓶盖时，亦如此操作；
③转接时，保证手一直在超净台内，免得带入外界细菌。
培养：
培养条件：白炽灯 12h/ 黑暗 12h＋ 20℃
PDA 培养基的配制方法，培养基的湿热灭菌操作
一、目的要求
1．学****并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2．学****并掌握棉塞的制作方法。
二、培养基的配制原理
培养基是人工配制的各样营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分别、判定、
保留各样微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类众多，营养种类多样，加上实训
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和研究的目的不同，所以培养基的种类好多，但无论是何种培养基，均应含有水分、碳源、
氮源、能源、无机盐等。不同微生物对 pH 值要求不同样，所以配制培养基时，还应根据不
同微生物对 pH 值的要求，将培养基调到合适的 pH 值范围。
三、实训材料和用具
琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖， 10﹪NaOH ， 10﹪ HCl ， 1mol／ L NaOH ， lmol ／L HCl ，
KNO 3，NaCl ，K 2HPO 4·3H20，MgSO4· 7H20，FeSO4 ·7H 2O ；试管，三角瓶，烧杯，量筒，
玻璃棒，天平，牛角匙， PH 试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，
四、操作方法与步骤
(一 ) 培养基的配制
PDA 培养基的配制其配方如下：土豆 200g，葡萄糖 20g，琼脂 15～ 20g，水 1000mL，
pH 值自然。
(1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小
块放入锅中，加水 1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持 20－ 30min，用可用 2 层纱布趁热
在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到 1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖 20g，琼脂 15～ 20g（提早搞碎），然后放
在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再
补充水分至