文档介绍：关于核酸检测技术
第一页，本课件共有140页
核酸检测技术
直接对动植物有害生物基因序列和结构进行测定。
核酸的分离纯化
PCR技术
核酸杂交技术
第二页，本课件共有140页
第1节
核酸的分离纯化
第三页，本课件erization (elongation, extension): The temperature is increased to 72℃ for optimal polymerization step which uses up dNTPs and required Mg2+.
The PCR cycle:
Three different steps in each PCR cycle
第二十一页，本课件共有140页
PCR的扩增？
第二十二页，本课件共有140页
How does PCR work
The first cycle
The second cycle
第二十三页，本课件共有140页
How does PCR work
The third cycle
The fourth cycle
第二十四页，本课件共有140页
2. PCR的类型
第二十五页，本课件共有140页
多重PCR（multiplex PCR）
巢式PCR（nested PCR）
定量PCR（quantitative PCR）
不对称PCR（asymmetric PCR）
反向PCR（inverse PCR）
逆转录PCR（reverse transcription PCR）
Overlap PCR
… …
第二十六页，本课件共有140页
PCR using several primer pairs SIMULTANEOUSLY
Typically generates a product band for each primer pair
多重PCR（multiplex PCR）:What
多重PCR（multiplex PCR）
第二十七页，本课件共有140页
Multiplex PCR: Why
Detect several genes at once
eg. transgenic plant screen
Internal controls
VERY important
Tells you how well the PCR reaction worked
Reduces “false negatives”
Reduces “false positives”
多重PCR（multiplex PCR）
第二十八页，本课件共有140页
Multiplex PCR: How
Same as regular PCR
Care in primer design
Much greater chance of primer-dimers
Much greater chance of artifacts
Annealing temperatures must be close
多重PCR（multiplex PCR）
第二十九页，本课件共有140页
A Typical Multiplex PCR Reaction
Sterile Water ul
10X PCR Buffer ul
MgCl2 (50mM) ul
dNTP’s (10mM each) ul
Primer1FWD ul
Primer1REV ul
Primer2FWD ul
Primer2REV ul
Primer3FWD ul
Primer3REV ul
DNA Polymerase ul
DNA Template ul
Total Volume ul
多重PCR（multiplex PCR）
第三十页，本课件共有140页
Multiplex PCR: Example
Three primer pairs
Control, resistance, and trait genes
Control gene fragment is largest and (almost) faintest
Trait gene is smallest and brightest
Resistance Gene
Trait Gene