文档介绍：第 34 卷第 6 期吉林大学学报( 医学版) Vol. 34 No. 6
2008 年 11 月 Jour nal of Jilin Univer sity ( Medicine Edition) Nov. 2008 1083
[ 文章编号] 16712587 Ⅹ(2008) 0621083203
重组人β2淀粉样蛋白 1242 在毕赤酵母中的表达与鉴定
Expression and identification of binant human β2a myloid
protein 1242 in Pichia pastoris
申茉函 1 , 王全才2 , 牟旭鹏1 , 陈洪波1 , 牛超 1 , 颜炜群1
(1. 吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室, 吉林长春 130021 ;
21 中国医科大学盛京医院第一神经外科, 辽宁沈阳 110003)
[摘要] 目的: 探索在毕赤酵母中表达人β2淀粉样蛋白 1242 ( hAβ1242 ) 的可行性。方法: 以含有 hAβ1242 基因
的质粒为模板, 采用 PCR 方法扩增所需 DNA 片段, 与毕赤酵母表达载体 p PICZα连接, 构建重组质粒 pP IC Zα2
hAβ1242并进行 DNA 测序分析。将其电击转化毕赤酵母菌株 X233 , 经 SDS2PA GE 和 Weste rn blotting 分析表达产
物。结果: 经测序证实, 获得的 hAβ1242 序列与基因合成的完全一致。SDS2PA GE 显示, 在约 4 000 处有一蛋白
带, We ster n blotting 证明表达产物与抗 hAβ1242抗体有特异性免疫反应。结论: 本研究在毕赤酵母中成功地重组
表达 hAβ1242 。
[ 关键词] 阿尔茨海默病;β2淀粉样蛋白; 毕赤酵母; 表达
[ 中图分类号] Q78 [ 文献标识码] A
阿尔茨海默病( Alzheimer’s disease , AD) 是首次在真核毕赤酵母中表达, 为进一步研究 Aβ1242
以认知功能障碍和记忆损害为特征的神经退行性疾的功能和其积聚导致的老年痴呆症作用机制及临床
病, 是老年人常见的一种痴呆症。通常病情呈进行防治提供实验依据。
性加重, 在 2~ 3 年内丧失独立生活能力, 10 ~
1 材料与方法
20 年内因并发症而死亡。AD 病理特征以脑神经细
胞外出现β2淀粉样蛋白(Aβ) 聚集形成的神经斑或 11 1 主要材料和仪器基因和引物由上海生工生
称老年斑、脑神经细胞内 tau 蛋白异常聚集形成的物工程技术服务有限公司合成; 表达载体 p PICZα
神经纤维缠结(N F T) 、脑皮层神经细胞减少以及为本实验室改造过的载体; 大肠杆菌 XL12Blue 为
累及皮层动脉和小动脉的血管淀粉样变性为主[ 1] 。本实验室保存菌种; 毕赤酵母 X233 购自美国
正常情况下, 神经细胞产生低浓度 Aβ, Aβ来 INV ITRO GEN 公司。限制性内切酶、 T4 DNA 连
源于淀粉样前体蛋白(amyloid precur sor prot ei n , 接酶、质粒提取试剂盒及逆转录试剂盒购自
A P P) 的水解, 由 39