文档介绍：仪器分析实验课件
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可乐、咖啡、茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析
一、目的要求
1、理解反相色谱的原理和应用；
2、掌握标准曲线定量法。
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二、原理
咖啡因又称咖啡碱，属黄仪器分析实验课件
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可乐、咖啡、茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析
一、目的要求
1、理解反相色谱的原理和应用；
2、掌握标准曲线定量法。
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二、原理
咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称为1,3,7—三***黄嘌吟，是由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。
%~%，%~%。可乐饮料、APC药片等中均含咖啡因。
分子式为C8H10O2N4，结构式为：
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样品在碱性条件下，用***仿定量提取，采用Econosphere C18反相液相色谱柱进行分离，以紫外检测器进行检测，以咖啡因标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做工作曲线，再根据样品中的咖啡因峰面积，由工作曲线算出其浓度。
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三、仪器与试剂
仪器  Agilent 1100液相色谱仪（美国），Econosphere C18反相色谱柱，l 0cm*4. 6cm；平头微量注射器。
试剂 
1、甲醇（色谱纯）；二次蒸馏水；***仿（A. R.）；lmol/L NaOH；NaCl（A. R.）；Na2SO4 (A. R.)；咖啡因(A. R.)；可口可乐（）；雀巢咖啡；茶叶。
2. 咖啡因标准贮备溶液
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四、实验步骤
1、按操作说明书使色谱仪正常工作，色谱条件为：
　　柱温：室温
　　流动相：甲醇／水＝ 60/40 
　　流动相流量：
　　检测波长：275nm
2、咖啡因标准系列溶液配制：分别用吸量管吸取咖啡因标准贮备液于五只10mL容量瓶中，用***仿定容至刻度，浓度分别为40、60、80、100、120mg/L。
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3、样品处理如下：
（1）将约100mL可口可乐置于一250mL洁净、干燥的烧杯中，剧烈搅拌30min或用超声波脱气5min，以赶尽可乐中二氧化碳。
（2），用蒸馏水溶解，定量转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。
（3），用30mL蒸馏水煮沸l0min，冷却后，将上层清液转移至100mL容量瓶中，并按此步骤再重复二次，最后用蒸馏水定容至刻度。
将上述三份样品溶液分别进行干过滤（即用干漏斗、干滤纸过滤），弃去前过滤液，取后面的过滤液。
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，***化钠溶液，1mL lmol/L NaOH溶液，然后用20mL***仿分三次萃取（10mL、5mL、5mL）。将***仿提取液分离后经过装有无水硫酸钠小漏斗（在小漏斗的颈部放一团脱脂棉，上面铺一层无水硫酸钠）脱水，过滤于25mL容量瓶中，最后用少量***仿多次洗涤无水硫酸钠小漏斗，将洗涤液合并至容量瓶中，定容至刻度。
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4、绘制工作曲线：待液相色谱仪基线平直后，分别注入咖啡因标准系列溶液10µL重复二次，要求二次所得的咖啡因色谱峰面积基本一致，否则，继续进样，直至每次进样色谱峰面积重复，记下峰面积和保留时间。
5、样品测定：分别注入样品溶液10µL，根据保留时间确定样品中咖啡因色谱峰的位置，再重复二次，记下咖啡因色谱峰面积。
6、实验结束后，按要求关好仪器。
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五、结果处理
1、根据咖啡因标准系列溶液的色谱图，绘制咖啡因峰面积与其浓度的关系曲线。
2、根据样品中咖啡因色谱峰的峰面积，由工作曲线计算可口可乐、咖啡、茶叶中咖啡因含量（分别用mg/L、mg/g和mg/g表示）。
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六、注意事项
1、测定咖啡因的传统方法是先经萃取，再用分光光度法测定。由于一些具有紫外吸收的杂质同时被萃取，所以，测定结果具有一定误差。液相色谱法先经色谱柱高效分离后再检测分析，测定结果正确。实际样品成分往往比较复杂，如果不先萃取而直接进样，虽然操作简单，但会影响色谱柱寿命。
2、不同牌号的茶叶、咖啡中咖啡因含量不大相同，称取的样品量可酌量增减。
3、若样品和标准溶液需保存，应置于冰箱中。
4、为获得良好结果，标样和样品的进样量要严格保持一致。
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七、思考题
1、用标准曲线法定量的优缺点是什么？
2、根据结构式，咖啡因能用离子交换色谱法分析吗？为什么？
3、若标准曲线用咖啡因浓