文档介绍：: .
小鼠C-jun (C-jun)酶联免疫
1. 血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集
血液的试管应为一次性的无热原，无内***试管。
2. 血浆：，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可
检测。避免使用溶血，高血脂标本。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (, pH=)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞
会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量
体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记
录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂
解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10
分钟，取上清检测。
4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
（具体处理方法可参考：?tid=477 ）
6. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7. 标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融，
1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。
8. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做
预实验，以确定稀释倍数)。
试验所需自备物品:
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水
4. 吸水纸检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超
过50℃，使用时洗涤液应为室温）。
3. 标准品: 加入标准品&，静置10分钟，待其充分溶解后，
轻轻混匀(浓度为25ng/mL)。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍
比稀释）。建议配制成以下浓度： 25、、、、、、、0 ng/mL ，
样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。： 25ng/mL的上述标
，混匀即可，其余浓度依此类推。
4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配
制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作
浓度。当日使用。
5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制
100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。
当日使用。
标准品稀释方法图例：(以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管)
25 0 ng/mL