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撰写人：___________日 期：__________鲜橙汁中，20℃～25℃发酵3d，产生明显酒味后，取菌悬液，准确吸取50μL放入YEPD固体培养基，以无菌刮铲刮匀，28℃培养2d后进行镜检（从中挑取生长菌落，染色，以待镜检），以酵母菌的特性及形态为基础筛选得到果酒发酵用酵母。见图1：
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图 1 果酒发酵用酵母
发酵酵母的筛选[4]
一级筛选：以在定额时间内发酵气泡产生的多少作为发酵能力强弱的指标进行筛选。
二级筛选：以糖度为15％的橙子汁进行发酵，以发酵后生成的酒香味、口感、色泽等感官指标进行筛选。
三级筛选：按照完整的橙子酒发酵工艺进行发酵，以发酵产品的理化指标和风昧等感官指标作为评判依据进行筛选。
橙子果酒发酵实验
发酵流程：无核橙一去皮一榨汁一调配(调整糖度)一接种酵母一发酵一贮存一过滤一橙子酒[4]
用蔗糖进行糖度调整，就筛选出来的酿酒酵母菌株与对照酵母分别进行橙子汁果酒发酵实验，在发酵速度、酒精生成、凝集性能等生物学特性方面进行比较[4]。
安琪酵母活化：室温条件下，活化25min，(接种量为2%，加水量为干酵母的10倍，配成1%的酵母活化液)[10、14]。
检测方法
（1）酒精度的测定：酒精计法[11]
（2）总糖的测定：费林试剂热滴定法[12]
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预滴定：吸取费林氏甲、乙液各5mL和试液5mL于250mL锥形瓶中，摇匀，在电炉上加热至沸，在沸腾状态下用2．5g／L葡萄糖标准溶液滴定，当溶液的蓝色将消失呈红色时，加2滴次***蓝指示剂，继续滴定至蓝色消失，记录消耗葡萄糖标准溶液的体积。
正式滴定：吸取费林氏甲、乙液各5mL和试液5mL于250m1锥形瓶中，和比预滴定少lmL的葡萄糖标准溶液，摇匀，在电炉上加热至沸，加2滴次***蓝指示剂，并保持沸腾2min，在沸腾状态下于lmin内用葡萄糖标准溶液滴定至蓝色消失，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。
计算公式：X＝（F-G×V）×1000/20÷100×
式中：X＝总糖的含量
F＝费林甲、乙液各5ml相当于葡萄糖的克数 g
G＝葡萄糖溶液的浓度g/ml
V＝消耗葡萄糖溶液的体积ml
（3）总酸的测定：直接滴定法[13]
（4）PH值的测定：精密级数字式酸度计
先用PH缓冲液调零，再取待测样酒品测定其PH值。
（5）凝集性能：生物显微镜观察
（6）原酒评价：感官品评鉴定法[15]
感官指标主要从色泽、味感特征、香气、体态等方面鉴定。
2．结果与讨论
分离与筛选结果
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自腐烂橙子中分离得到酿酒酵母菌。
试液制备时增加了蒸馏水加入量，中和以前加入了指示剂，终点易判，在费林氏液中加入适量试液，并改用葡萄糖标准溶液反滴定，再计算出酒样中总糖含量；滴定量控制良好，结果更为准确（发酵到第六天测得的总糖含量，见表1）。
预滴定正式滴定 费林氏液 葡萄糖总 糖
酵母菌体积 体积 浓度 液浓度
mlml gg/ml g/L
（实验组）
（对照组）
上表结果表明，作为对照的安琪酵母利用糖的速度快，其发酵周期短，橙子汁中的还原糖到第6d基本就消耗完；所筛选出的菌株中，发酵能力强，其发酵周期更长，发酵较为彻底。
酵母菌酒精度（%vol）
果酒酵母11
（实验组）
安琪酵母8
（对照组）
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从发酵最终得到橙子酒之间的比较来看，果酒酵母菌株发酵出的橙子酒，其酒精积累能力表现比较强。论文格式。
橙子酒中总酸的比较
酵母菌酒样体积 消耗氢氧化钠标准