文档介绍：生物化学实验报告
姓名： XXX

学号： XXXXXXXXXX

专业年级： 2015级护理（助产）

组别：第六实验室
生物化学实验报告
姓名： XXX

学号： XXXXXXXXXX

专业年级： 2015级护理（助产）

组别：第六实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
Folin-酚试剂法测定蛋白质含量
实验日期
2016-10-18
实验地点
第六实验室
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
一、实验目的
1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。
2、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。
3、熟悉分光光度计的用法。
二、实验原理
1、在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质- Cu2+复合物。
2、蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。
3、在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。
三、材料与方法：

（1）样品
健康人血清（300倍稀释）；正常人血清蛋白质含量：60~80 g/L
（2）试剂
牛血清白蛋白标准液（200μg/ml）；碱性硫酸铜溶液（当日有效）；Folin-酚试剂
（3）仪器与器材
V-1100分光光度计；恒温水浴箱；试管6支、试管架；加样枪、加样枪架；坐标纸

流程图：
比色
40℃
水浴
10min
2s内混
合均匀
加酚
试剂
混合均匀，
静置10min
冷却
至室温
蛋白
标准液
碱性硫酸铜溶液
（1）取6支试管做好标记，再按下表加样：（1作空白对照，2-5作标准试管，6为待测样品）
试剂（ml）
1
2
3
4
5
6
牛血清白蛋白标准液
-

-
样品液（稀释300倍）
-
-
-
-
-

蒸馏水

碱性硫酸铜

Folin-酚试剂

蛋白质浓度（μg/ml）
0
40
80
120
160
未知
（2）往各试管中按表格要求加入蛋白标准液、样品液、蒸馏水及碱性硫酸铜试剂后，混匀室温静置10min。
（3）向各管内加入Folin-，并于2s内迅速摇匀。
（4）加样完毕后，将各试管进行40℃水浴10min。
（5）冷却至室温后，以500nm波长比色，以1号管作空白对照，按2-6顺序测定试管内溶液吸光度并重复测三次，记录数据并计算结果