文档介绍：血糖的测定
实验四
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血糖及血糖水平的概念：
血糖：指血液中的单糖：葡萄糖
血糖水平：血浆中葡萄糖浓度
血糖总维持在恒定水平： ~
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调节血糖水平的激素：胰岛素血糖的测定
实验四
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血糖及血糖水平的概念：
血糖：指血液中的单糖：葡萄糖
血糖水平：血浆中葡萄糖浓度
血糖总维持在恒定水平： ~
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调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。
血糖水平异常：⑴高血糖及糖尿病；⑵低血糖
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临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。
科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。
测定血糖的意义
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体液糖的测定项目：
①血糖浓度测定
②口服糖耐量试验
③糖化血红蛋白试验
④糖化血清白蛋白测定
⑤胰岛素测定
⑥C-肽测定等
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测定方法
无机化学法： Folin-Wu法
有机化学法：邻甲苯***法
酶法：葡萄糖氧化酶法
血糖测定的常用方法
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葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理
（1）葡萄糖＋O2＋H2O
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
葡萄糖酸＋H2O2
葡萄糖氧化酶（GOD）
H2O ＋红色醌式物质
过氧化物酶
（POD）
Trinder反应
505nm
光吸收法测定
相对血糖浓度
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分光光度计的原理
分光光度技术
电泳技术
层析技术
离心技术
生物化学的四大研究技术：
光的波粒二象性
物质的光吸收性
分光光度计的原理
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分光光度计的工作原理
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朗伯-比尔定律
朗伯定律：A=k1L
比尔定律：A=k2C
朗伯-比尔定律：如同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光度的影响，则吸光度与溶质的浓度和溶液的厚度的乘积成正比。
A=KLC
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朗伯-比尔定律应用
A标=KC标L
A样=KC样L
标准品法测定未知样品含量
C样=
A样
A标
×
C标
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1. 接通电源，调整波长。
2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。
3. 调模式为“透射比”，对空白对照进行调“0”（开盖）和调“100”（闭盖）。
4. 调模式为“吸光度”，将空白对照调“0”，测定待测样品的吸光度值。
分光光度计的使用
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葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测激素对血糖浓度的影响
方法
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（1）取4支试管，按下表加入试剂:
试剂
标准管(ml)
测定管1(ml)
测定管2(ml)
空白管(ml)
血清样品
–
–
葡萄糖标准液
–
–
–
蒸馏水
–
–
–
酶酚混合试剂
实验步骤：
充分混匀，37℃ 水浴中保温20min；
冷却至室温后，505nm处比色
比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。
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（2）计算：
依据朗伯-比尔定律： A=KLC
标准管葡萄糖浓度：5mmol/L
测定管葡萄糖含量（mmol/L）
＝
测定管光密度
标准管光密度
×5
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正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的2/3。
血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。
酶酚混合液一般现用现配。
注意事项
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补充实验
测2-3名同学早餐后和空腹血糖的水平，并比较二者之间的区别。
使用怡成JPS-5型血糖仪。
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小结
1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法测定血糖的原理。
2、分光光度计的正确使用。
3、实验操作中存在的问题。
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其他常用血糖测定方法介绍
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法
Folin-Wu法
邻-甲苯***法
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原理
葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成Cu+ ，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量。
评价
稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还 原物质的影响。
空腹正常