文档介绍：实验名称
(Title of Experimetn)
蛋白质的定量测定〔Folin-酚试剂法〕
实验日期
(Date of Experiment)
XXXX
实验地点(Lab No.)
XXXX
合作者(Partner)
样品蛋白质浓度×2×300
参考：正常人血清蛋白浓度范围为60~80 g/L。
①试剂要求：实验所需的试剂必须是新鲜配制，不然会存在被空气及其他物质氧化复原的情况，干扰实验的测定。
②控制时间：Lowry反应的显色随时间不断加深，因此各项操作必须精确控制时间。严格按照实验步骤的操作，规定的时间是多少就多少。水浴时间也不宜过长。同时，
在最后从水浴加热后取出冷却后，需及时的进行比色测定。防止混合液中物质发生系列变化和反应。
③加入Folin-酚试剂后，需要马上混合摇匀，防止磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏。
④干扰物质的影响：凡干扰双缩脲反应的基团，均可干扰Folin-酚反应。这些物质在所测样品中含量较高时，则需做校正曲线。假设所测的样品中含硫酸铵，则需增加碳酸钠—氢氧化钠浓度即可显色测定。假设样品酸度较高，也需提高碳酸钠—氢氧化钠浓度1—2倍，这样即可纠正显色后色浅的弊病。
⑤绘制曲线要求：作过原点的直线或光滑连续的曲线，该线表示实验点的平均变动情况，因此该线不需全部通过各点，但应尽量使未经过线上的实验点均匀分布在曲线或直线两侧。(电脑Excel绘图，可以不考虑)
⑥操作要按照实验步骤，一步一步来，防止操作问题导致的操作误差的出现等。
二、实验记录
实验条件
材料及试剂：本次实验的试剂和材料均是实验室配制好的，比例和浓度同实验预****故不再赘述。
实验时间表：
总表
实验步骤
消耗时间
混合溶液
未计时
滴加溶液静置
10min
加Folin-酚试剂、水浴
10min
室温冷却
27min
等待
20min
比色测定
6min
附表
项目时刻表
试管1
试管2
试管3
试管4
试管5
试管6
加硫酸铜
8’42”09
8’43”20
8’44”29
8’45”45
8’46”55
8’47”55
水浴
8’52”09
8’53”20
8’54”29
8’55”45
8’56”55
8’57”55
冷却等待
9’02”09
9’03”22
9’04”29
9’05”45
9’06”55
9’08”00
操作技巧：
①在这一次的实验中，关键的要点在于滴加Folin-酚试剂的摇匀，必须快速摇匀，保证反应优先进行。振荡试管时，振荡的正确方法是用手腕的力左右摆动，使试管中液体混合均匀且不漏出。最后放入到水浴中加热。
②在分光比色的时候，测量一次后重新凋零，不能继续测量等。
操作失误：
全部实验过程中，就出现了一次失误，即在试管4加入Folin-酚试剂，充分摇匀，在放入水浴加热之间，部分液体由于磕碰而溅出。其余操作严格按照要求一步步完成，理论不存在着失误。
分析：Folin-酚与液体已经混合均匀并反应，在后面的水浴加热后，只是影响到了整体的试管4的反应后得到的溶液量，而不影响颜色的变化及最后的比色测定，故该失误不会对实验产生测定的偏差。
实验现象
①在滴加硫酸铜溶液后，摇匀，产生较多的黏性气泡且附着在液体外表。液体颜色变化不深。
②在滴加Folin-酚试剂水浴加热后，除试管1为淡黄色外，其余试管均成不同的蓝色。具体看下列图：
图一水浴后各试管的情况图
分析：标准液的试管中〔2-5〕蓝色不断加深，同实际的标准液的含量多少正相关，而试管6的颜色不深，在1-2试管之间，根据实验原理初步可以判定的是：该样品液的蛋白质含量将不会在60-80g/L之间，而是在0-40g/L。即实验存在一定的问题，详见结果的分析与讨论。
实验原始数据
本次实验原始数据是在500nm的波长下，各试管混合液的吸光度值，结果见下表1
表1 500nm波长吸光度值记录
测定次数
各管吸光度值
2
3
4
5
6
1
2
3
各管平均值
三、结果与讨论
数据处理
利用原始数据，可得到各管的平均值：
2管：=〔++〕/3=；
3管：=〔++〕/3=；
依次得到4-6管的吸光度值如下所示：
测定次数
各管吸光度值
2
3
4
5
6
各管平均值
0
0
Excel绘制蛋白质的标准