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产品无菌检验操作规程
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产品无菌检验操作规程
编制 日期 审核 日期 批准 种培养物时，动作应轻、准，防止培养物溅出，产生汽溶胶，造成污染。 操作过程中所有的带菌物品，用后均应作消毒、灭菌处理。可在检验过程中随用
随时放入消毒液缸内浸泡或消毒桶内，或在检验完成后经传递窗传至一般区，立即用压力蒸汽灭菌锅121℃灭菌30分钟。 8 培养基制备
、厌气菌培养基（硫乙醇酸盐流体培养基）的制备 所用试剂
酪胨（胰酶水解） *** L- % （或硫乙醇酸）（） 制备
除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，±。 硫乙醇酸盐流体培养剂氧化层的颜色要求
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1\/5，否刚需经100℃水浴加热到粉红色消失（不超过20分钟）迅速冷却，只限加热一次，并应防止被污染。 霉菌培养基（改良马丁培养基）的制备 水1000 制备
除葡萄糖外，取上述成分混和，微温溶解，，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，±。
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还可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基，按照使用说明书配制。 培养基配制后应尽快灭菌，避免微生物繁殖。一般采用高压蒸汽121℃灭菌30分钟。 制备好的培养基应在2～25℃保存，在3周内使用。 培养基的无菌性检查
每批配制的培养基均应进行无菌性检查（可与产品无菌检验同步进行）。检查时，每批培养基随机取不少于5支（瓶）培养14天，应无菌生长。 9 稀释液、冲洗液的制备 %蛋白胨水溶液
，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装后置入压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌30分钟后，于4℃保存备用。 ***化钠-蛋白胨缓冲液
、、***、，加水1000ml。微温溶解，滤清，分装后置入压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌30分钟后，于4℃保存备用。
浸提介质：9g\/L无菌***化钠溶液，可直接从有证单位采购大输液。 10 对照菌液制备
无菌检验所用的菌株传代次数不得超过5代。
，接种一白金耳至营养琼脂培养基内，在30～35℃培养18～24h后备用，%***化钠溶液加入在6支小试管内，%***化钠溶液，在压力锅内经121℃灭菌30min备用。将已配好的金
，稀释成浓度1:10的菌液； l菌液加入第二支小试管内，稀释成浓度1:100的菌液，同法稀释成浓度1:106（每ml含菌量≤100CFU）即可。 采用平皿计数法测定活菌数。 11 无菌检验培养温度
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硫乙醇酸盐流体培养基，置30～35℃培养。 改良马丁培养基，置23～28℃培养。 12 无菌检验
如产品注册标准中明确“产品应经过一个确认过的灭菌过程”，。
放样
每个灭菌批次按已验证的灭菌工艺，在灭菌柜内相应的位置放置适量菌片，灭菌后对菌片进行无菌检验。 菌片贮存
灭菌前、后菌片应按菌片说明书规定条件保存。（REVEN公司菌贮存温度为15～27℃） 接种
开启超净工作台单向层流，在此环境下，分别将灭菌后的菌片成对放入已灭菌的硫乙醇酸盐流体培养基中。同时以金黄色葡萄球菌作阳性对照，以未接种的硫乙醇酸盐流体培养基和未接种的改良马丁培养基作为阴性对照。 培养
阳性对照管于30～35℃细菌培养箱培养48～72小时。 其余硫乙醇酸盐流体培养基于30～35℃培养7天。 改良马丁培养基于23～28℃培养7天。 结果判定
培养后，阳性对照应有菌生长，阴性对照和被检样品未见需气菌、厌气菌和霉菌生长的为合格