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褪黑素延缓糖尿病大鼠肾脏细胞衰老的机制研究 (1).pdf

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文档介绍:万方数据
褪黑素延缓糖尿病大鼠肾脏细胞衰老的机制研究陈永昕,刘婉卿,周青,汪渊,王怡,朱华庆因素的相互作用,包括高血糖水平、晚期糖基化终产功能丧失则会引发终末期肾病康带来巨大威胁。研究。作为细胞衰老的标志物,它们均是调控细胞周期的衰老到肾脏组织,剪刀剪下,置于预冷的��撼迦芤褐衅��次,洗去血和残余结缔组织,滤纸除去残余水分,一部分经液氮急速冷冻,另一部分采用最佳切削温度包埋剂冰冻包埋后切片,每片厚度为�����⒋�酶溶液���嫦路跤�值�,根据说明书公式计算肌酐值;��喊此得魇�配置好各试剂,取�斗��庋�炯尤��斗�撼��波长下测定吸光度值,根据公式���染色观察从一�℃冰箱取肾组织冰冻切片,按常规方法进行���染色,光镜下观冰冻切片,按说明书步骤进行�.�甮�染色,光镜�琍�漂洗后,用滤纸除去残余水分,用剪刀剪碎后转入研磨器中,加入���,置于冰上充分研磨至匀浆,再转至�管中,反复冻融�危�℃离心机�痬�离心���笕∩锨逡骸2捎肂�法测定蛋白浓度后,加蛋白裂解液调配成等体积同浓度的样本,再加入蛋白上样缓冲液,混匀后于沸水��帘湫裕���姹4妗E渲肧�.��凝胶,各组样本等量上样进行电泳,电泳完成后将蛋℃孵育过夜,��缓冲液洗膜后二抗�:�室温下孵育�以������砑�治龈魈醮�叶戎担�握誃.���分析,数据均采用戈±�硎荆�榧洳捎玫ヒ蛩胤讲�水平的影响模型组大鼠与正常组比较,����水平均有增高��.��籑�治疗后,与模型组比较,��锽�、���骄�邢陆�����。大鼠肾间质纤维化明显;经��瘟坪螅�涸�宋��大鼠肾组织细胞出现明显的�—�甮�染色阳��稍ず蠖訢�笫笊鲈嘧橹痯�、��白水平降低��.��籑�治疗后,�大鼠肾脏组织中��鞍妆泶锼�较陆�����琇��������;正置生物显微镜�鹿鶯��公司����方法��.�炷7椒ḿ笆笛榉肿镾�笫缶�视π晕�养后,随机分为正常组、模型组和��椋��只。�/������周。��.�瓯静杉�按�硎紫瘸迫��笫筇逯�量,采用***麻醉后固定在实验板上,找到主动脉,�螅����⊙G搴笞龊帽昙遣⒅糜�化合物��������,��于一�℃冰箱中备用。��.�<◆�虰�取标记好的血清,检测各组血肌酐��������,��和���健���涸��装迳希�挎軱分别加入����尽��������波长测定吸光度值�,再加入�肛�溉芤築,再次测定吸光度酶液中,混匀后�℃准确水浴����缓蠹尤敕�显色剂和碱性次***酸钠各��,充分混匀后�℃水浴�计算���俊�察肾组织病理学变化。�半乳糖苷酶���猤��旧�取肾组织下观察蓝色沉淀。��检测法取保存于冰箱中的肾脏组织,称取���蛋白裂解液�琍���:�中煮�白转至��膜上,转膜完成后置于摇床上,以��脱脂牛奶室温封闭��R豢筽��:���、���:���、���簂��、�����簂��、�������茨ぃ�渲孟杂凹两�邢杂啊�计算相对灰度值。��统计学处理采用���.�砑��惺��分析,以����2钜煊型臣蒲б庖濉��峁���稍ず蠖訢�笫笊鲈嘧橹疭�、��见表�����染色结果与正常组比较,模型组�染色阳性率显著下降。见图���·��染色结果与正常组比较,模型组性;与模型组比较,��镾��甮�染色阳性率显著下降。见图��蛋白表达水平的影响与正常组比较,模型组大鼠肾脏组织中�