文档介绍：精选优质文档-----倾情为你奉上
精选优质文档-----倾情为你奉上
专心---专注---专业
专心---专注---专业
精选优质文档-----倾情为你奉上
专心---专注---专业
酶联免疫吸附测定法（ELISA）
业
精选优质文档-----倾情为你奉上
专心---专注---专业
间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
竞争法测抗体
图（4）
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。
竞争性测抗原
小分子抗原或半抗原缺乏可作为夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中的抗原含量越多，结合在固相上的酶标抗原越少，最后显色也越浅。小分子激素、药物等多用此法。
捕获包被法测抗体
精选优质文档-----倾情为你奉上
精选优质文档-----倾情为你奉上
专心---专注---专业
专心---专注---专业
精选优质文档-----倾情为你奉上
专心---专注---专业
以IgM抗体为例。血清中针对某些抗原的特异性IgM常和非特异性IgM，以及特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM的测定。捕获法则较好地解决了上述问题，其原理是先用抗人IgM（μ链）抗体包被固相载体，使血清中所有IgM(包括特异性与非特异性IgM)均固定在固相上，经洗涤去除IgG后，再测定特异性IgM。此方法目前主要用于检测各类早期感染的特异性抗体IgM。
ABS-ELISA法
ABS为亲和素（avidin）生物素（biotin）系统（system）的略语。亲和素是一种糖蛋白，分子量60000，每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成。生物素为小分子化合物，分子量244。用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚***酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物，标记方法颇为简便。生物素与亲和素的结合具有很强的特异性，其亲和力较抗原抗体反应大得多，两者一经结合就极为稳定。由于一个亲和素可与4个生物素分子结合，因此如把ABS与ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素（LAB）法和桥联亲和素-
精选优质文档-----倾情为你奉上
精选优质文档-----倾情为你奉上
专心---专注---专业
专心---专注---专业
精选优质文档-----倾情为你奉上
专心---专注---专业
生物素（ABC）法两种类型。两者均以生物素标记的抗体（或抗原）代替原ELISA系统中的酶标抗体（抗原）。在LAB中，固相生物素先与不标记的亲和素反应，然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期，亲和素从蛋清中提取，这种卵亲和素为碱性糖蛋白，与聚苯乙烯载体的吸附性很强，用于ELISA中可使本底增高。从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点，在ELISA应用中有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，在临床检验中ABS-ELISA应用不多。
ELISA试剂的组成
ELISA试剂中有三个必要的组成部分：免疫吸附、结合物、酶的底物。
常见的组成如下：
已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；
酶标记的抗原或抗体（结合物）；
酶的底物；
阴性对照品或阳性对照品，参考标准品；
结合物及标本的稀释液；
洗涤液；
酶反应终止液；
固相载体：
聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍能保留原来的免疫学活性。
聚***乙烯，对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。
良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一条各孔之间性能相近。
包被的方式
将抗原或抗体固定在固相载体上的过程称为包被。
蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用。这种物理吸附是非常特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。
精选优质文档-----倾情为你奉上
精选优质文档-----倾情为你奉上
专心---专注---专业
专心---专注---专业
精选优质文档-----倾情为你奉上
专心---专注---专业
不易吸附的非蛋白质抗原，可用间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大提高，因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法。
亲和素生物素，即用亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA,这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。
脂类物质，无法