文档介绍：实验9 影响酶促反应的因素——温度、pH、,催化不同的生物化学反应:过氧化氢酶能催化过氧化氢分解释放氧气和水;唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种糊精、麦芽糖,用碘显色或本尼迪试剂可以检验酶催化的水解反应产物,并比较反应速度,从而衡量酶的比活性。通过试管颜色反应,可以定性研究影响酶活性的因素。3酶催化反应的活力受到温度、酸碱度和离子强度等因素的影响。一般,温度每增高10℃,反应温度增加一倍,但同时,酶作为蛋白质,温度过高会发生变性逐渐失活,反应速度达到最大值时的温度称为某种酶的最适温度。酶活力与环境酸碱度密切相关,某种酶只在一定pH范围才具有活力,酶活最高时的pH称为该酶的最适pH。Cl-可以使淀粉酶的活力增加,是其激活剂;而Cu2+ 使淀粉酶的活力下降,是其抑制剂。4实验器材材料:唾液试剂:% 蔗糖,%淀粉,1% 淀粉, mol/L Na2HPO4, mol/L NaH2PO4, 1% NaCl, 1% CuSO4,1% Na2SO4,本尼迪试剂,碘水,用具:50 mL 烧杯2 ,试管,玻璃漏斗,刻度移液管(2mL,5 mL) ,1000 uL移液器,37℃恒温水浴,冰浴,电炉,沸水浴,6孔白瓷板,一次性吸管5实验操作与现象1酶液的收集制备漱口后,收集唾液> ,加入30倍去离子水稀释,混合。配制酶促反应液时,其它组分均用刻度移液管进行;最后添加酶液时,可用移液器;显色反应,可用一次性吸管滴加试剂。6实验操作与现象1酶的专一性结论:唾液淀粉酶专一性催化淀粉水解。无酶对照底物对照试管1#2#3#4#% 淀粉(mL) 2-2-% 蔗糖(mL) -2-2唾液(mL)--(mL) --现象在白瓷盘中滴加2滴碘液,反应开始时和反应结束后分别取两滴反应液,观察显色反应(37 ℃反应10 分钟)。(此处可初步判断酶活力)现象本尼迪试剂(mL) (min)5555现象7二温度对酶活力的影响试管1#2#3#4#5#备注1% 淀粉(mL) (2 min)37 ℃0 ℃沸水浴0 ℃沸水浴唾液(mL) min 37 ℃0 ℃沸水浴冷却0 ℃37 ℃沸水浴37 ℃碘液(滴)2 2222现象结论:本次实验条件下,唾液淀粉酶最适温度为?0 ℃可逆性抑制酶活性;沸水浴则使酶变性失活。操作注意:严格控制温度,碘显色反应均在控温处进行。酶活力较大、小的组,可以调节酶用量,或室温代替37 ℃进行。8三pH对酶活力的影响试管1#2#3#4#5# M Na2HPO4(mL) M NaH2PO4(mL) % 淀粉(mL) 11111温度预处理混匀,37 ℃孵育2 min唾液(mL) min 取一滴,碘显色,至一管颜色变淡时取出所有试管,各加入2-5 滴碘液。摇匀,观察现象结论:实验测得唾液淀粉酶的最适pH为?9四离子对酶活力的影响试管1#2#3#4#备注1% 淀粉(mL) % NaCl (mL) 1---1% CuSO4(mL) -1--1% Na2SO4(mL) --1-水(mL) ---1摇匀,37 ℃反应2分钟。(据第一次显色情况,调节观测频度)唾液(mL),反应开始后每1-2min各管取两滴反应液,碘显色观察;记录最先显著变浅的管号和反应时间。将所有试管取出,加入2滴碘液,比较颜色。结论:实验测得Cl-是唾液淀粉酶的?而Cu2+是?10