文档介绍：中国医学科学院&北京协和医学院硕士学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方以外,不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:0眵签字日期:斌年.|D其I'EEl学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解j匕塞逊塑匡堂院有关保存、使用学位论文的管理办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权j匕塞坯麴医堂瞳可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名:守1移辩嗍:冲/嗍腼导师签名:签字日期:扣7年fp月d,日论文(一)抗猪鼻支原体单克隆抗体的研制及双抗体夹心ELISA检测法的建立中周医学科学院&北京协和医学院硕?}:学位论文中文摘要猪鼻支原体(Mycoplasmahyorhinis)是猪鼻腔的常在菌,除了在自然条件下可引起猪的肺炎,近年来被发现其与人胃癌、大肠癌有高度相关性,已经被认为是一种新发人传染病的病原。由于缺乏简单、快速的检测方法,该病原在人群中的感染情况尚不清楚。因此,该病原检测方法的研究将是流行病学研究的关键。血清学检测方法以其灵敏度高、简便快捷及费用相对低廉等各种优点已经广泛用于病原微生物感染的实验室诊断,尤其是直接血清学方法对于因带菌量少、血清抗体滴度较低的感染检测具有较大的优势。因此,本研究从单克隆抗体研制着手,进而建立以检测抗原为目的的双抗体夹心酶联免疫吸附测定试验法(ELISA),以期发展一种特异、敏感和快速的人猪鼻支原体感染的检测方法。为此,我们从以下几个方面进行了研究。首先,单抗的制备与鉴定。361(购自中国兽药监察所)株全菌抗原免疫BALB/c小鼠,经细胞融合,用ELISA法筛选获得ZBl"~ZBl7共17个阳性杂交瘤细胞株,其分泌抗体的效价最高达1:,并与实验动物常见的7种病原菌及11种支原体呈阴性反应;IgG亚类分别为IgGt、IgG2a、IgG2b、IgG3;免疫印迹试验显示,ZBl、ZB2及ZBl6与相对分子质量为35x103的抗原有特异性结合,而ZB3和ZBl0与相对分子质量为70x103的抗原有特异性结合。其次,我们建立了以单抗为诊断抗体的双抗体夹心ELISA法。采用最佳配对实验,筛选出以单抗ZBl作为包被抗体、ZBl、(、)作为检测抗体的配对,对猪鼻支原体抗原的检测限均可达到ng级水平,,,与人呼吸道常见的致病微生物及11种支原体均无非特异性反应。综上所述,本研究采用B淋巴细胞杂交瘤细胞技术成功地制备出了17株较高特异性和敏感性的抗猪鼻支原体单克隆抗体,并以其为诊断抗体建立起以检测抗原为目的的双抗体夹心ELISA法,显示了较好的特异性和敏感性。为人群猪鼻支原体流行病学研究提供了一种更可靠而便利的手段,并将对这一新发感染性疾病的研究,进而对人类肿瘤防控有重要的意义。关键词:猪鼻支原体;单克隆抗体;检测方法2中国医学科学院&北京协和医学院硕。}:学位论文AbstractAsthepathogenofporcinepneumonia,Mycoplasmahyorhinisisknowntobebroadlydistributedinthenasalcavity,andisofmajorconcernforitsinitiatecertainca琢Ⅺ鹅,,serologytestiswidelyappliedforitscheap,convenientandhighsensitivity,,itisimportanttosetupthemore