职称晋升论文[职称晋升-2012副主任医师晋升论文赏析]..doc

文档介绍：职称晋升论文[职称晋升-2012副主任医师晋升论文赏析]
    
益气活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响
【关键词】  肝细胞
    ［摘要］目的：观察益气、活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响。方法：以自然衰gen; cyclin D1; cyclin E; qibenefiting recipe; bloodactivating recipe
　　随着细胞及分子生物学的发展，已经发现一些与细胞衰老密切相关的基因及转录因子（反式作用因子）［1～3］。纵观历代中医文献，延缓衰老的方药基本属于补肾、健脾、益气和活血范畴。近代研究显示：上述四类方药均有不同程度抗自由基、调节免疫功能、提高肝脏蛋白质含量、改善肝脏超微结构等延缓衰老的作用［4］。实验研究还表明：补肾方药能促进老年大鼠肝脏cHras、cmyc、cfos、cjun mRNA的表达，下调p53 mRNA的表达［5］。本实验从细胞增殖调控角度，根据中医理论，从益气活血的抗衰经典方中分别选择几味有代表性的中药组成小复方，以自然衰老大鼠为衰老模型，应用RTPCR和Western blotting法研究益气、活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因p16、p21、cyclin D1、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和cyclin E表达的影响。
　　1材料与方法
　　  益气方选用党参、黄芪、炙甘草（取自《时氏医道》保元汤），活血方选用川芎、当归、赤芍（取自经方四物汤）。中药制剂采用水提醇沉法制备后，分装于消毒好的塑料瓶中，于－20 ℃保存。
　　  SD雄性大鼠（上海中医药大学实验动物中心提供）24只，分成青年对照组（5月龄）、老年对照组（22月龄）、老年益气组（22月龄）和老年活血组（22月龄）。老年益气组和活血组的用药剂量为临床***剂量的20倍（按每千克体质量的用药量进行换算），采用饮料方式给药，每周服药5 d，停药2 d，自18～22月龄连续给药4个月。
　　  肝组织细胞总的RNA按Trizol一步法提取，具体步骤按试剂说明书操作。βactin PCR引物［6］：5’CCAGCCATGTACGTTGCTATCCAG 3’，5’GGAACCGCTCATTGCCAATGGTGA 3’，扩增片段为378 bp；p16 PCR引物：5’ATGGAGTCCTCTGCAGATAG 3’，5’TTAG CGCTGCTTTGGGGGTT 3’，扩增片段为480 bp；p21PCR引物：5’ATGTCCGATCCTGGTGATGT3’，5’GGGCTTTCTCTTGCAGAAGA 3’，扩增片段为495 bp；cyclin D1 PCR引物：5’ATGGAACACCAGCTCCTGTG 3’，5’TGGTGTTCCATGTCGGTGG 3’，扩增片段为888 bp；PCNA PCR引物：5’ATGTTTGAGGCACGCCTGAT3’，5’AGATCCTTCTTCATCTTCGA 3’，扩增片段为786 bp；cyclin E PCR引物：5’AAAGAAGAAGGTGGTTCCGA 3’，5’TCATTCTGTCTCCT GCTCAC 3’，扩增片段为1 191 bp