文档介绍：关于免疫实验技术
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利用免疫学原理来检测抗原、多种免疫分子(抗体、补体、细胞因子和粘附分子等)及免疫细胞的实验过程。
有助于疾病的辅助诊断、治疗及预后判断 。
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应抗体(或抗原)结合反应，在适宜的条件下，出现凝集现象。
正向间接凝集反应 用可溶性抗原包被载体以检测抗体。
反向间接凝集反应 用抗体包被载体以检测抗原。
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二、沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体结合，当两者比例合适，并有适量电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线。
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沉淀试验（precipitation test）
可溶性抗原
细胞裂解液
＋
抗体
（沉淀素）
电解质
（生理盐水）
＋
37℃～50℃数小时
沉淀反应（清澄液中出现混浊沉淀）
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沉淀反应分类
（1）琼脂扩散试验
（2）免疫电泳试验
对流免疫电泳：原理：在阴极孔内加抗原，阳极孔内加抗体。通电后，抗原带负电荷较多，分子较小，向阳极泳动；抗体分子带负电荷较少，加上分子量大，在琼脂的电渗作用下向阴极泳动。
（3）环状沉淀试验
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（1）单向扩散试验
（Single redial diffusion test）
预先混有抗体
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（2）双向扩散试验
（Double diffusion test）
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（3）对流免疫电泳
作用及特点：
抗体球蛋白移向阴极，抗原分子移向阳极，当两者在适当比例处相遇，即形成灰白色沉淀线。
检查乙型肝炎抗原及甲胎蛋白，敏感度比双向扩散法高约10倍，只需1～2小时即可获得检验结果。
不能定量测定。
Ag
Ab
_
+
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三、 免疫标记技术
原理： 利用酶、荧光素、胶体金、发光物质以及放射性核素等标记物来标记抗原或抗体，再与标本中的抗体或抗原反应，最后测定复合物中的标记物。
优点：特异、敏感、快速，可作定性、定量或定位测定。
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依据检测物分两类：
(immunohistochemical technique)，用于组织/细胞中抗原或抗体的定位；
(immunoassay)，用于液体标本中抗原或抗体的检测。
依据标记物的不同，可分为：
酶免疫技术、荧光免疫技术、金免疫技术、化学发光免疫技术和放射免疫技术。
1、酶免疫技术
酶免疫技术是以酶标记的抗体或抗原进行抗原抗体反应。
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酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA) 属固相酶免疫测定
ELISA原理：
把待测标本(含有未知抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的顺序与固相抗原或抗体起反应，再洗涤固相载体，随后加入酶的底物，底物受酶催化转变为有色产物。根据颜色的深浅对待测物质定性或定量。
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三种试剂：
①固相抗原或抗体
即把抗原或抗体用合适的方法连接到固相载体表面，同时保留它们的免疫活性；
②酶标抗原或抗体
即把某些酶用合适的方法连接到抗原或抗体表面，同时保留它们的免疫活性以及酶的催化活性。常用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)；
③酶作用的底物
常用的底物是邻苯二胺
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ELISA的类型：
(1)双抗体夹心法 测抗原
1）已知抗体包被
2）洗板
3）加待检抗原标本
4）洗板
5）加酶标记抗体
6）洗板
7）加底物显色，测定
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（2）间接法 测抗体
1）己知抗原包被
2）洗板
3）加待检病人血清
4）洗板
5）加酶标记抗人IgG
6）洗板
7）加底物显色，测定
（3）竞争法 测抗原或抗体
测定抗原：在待测管中加入受检抗原和酶标抗原，使它们同固相抗体进行竞争性结合。
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酶联免疫吸附试验（ELISA）
间接法
Ag
待检血清
酶标抗抗体
检测
抗体