文档介绍：关于动物细胞工程不含细胞培养
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植物体细胞杂交的意义：
打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种。
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一、动物细胞融合
细胞融合是正常的生命活动。项目
植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较
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二、单克隆抗体
什么是抗体？
抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
B淋巴细胞（浆细胞）能产生抗体。
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（一）获得抗体的传统方法
1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。
2、缺点：
产量低，纯度低，特异性差。
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人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。
1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念
用单个B淋巴细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。
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2、怎样才能获得单克隆抗体？
提示1：仅用细胞培养技术可行吗？
提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？
提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？
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如何大量生产单克隆抗体？
利用B淋巴细胞产生抗体的功能。
利用肿瘤细胞无限增殖的特性。
利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。
利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。
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（二）单克隆抗体的制备
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整个制备过程为何要经过两次筛选?
第一次筛选：用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞
第二次筛选（克隆化培养和抗体检测）：筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。
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如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？
融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。
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在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下，培养得到的细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体。
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单克隆抗体的概念：
由单个杂交瘤细胞进行无性繁殖,也就是通过克隆，形成细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。
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注射抗原
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
细胞融合、筛选
杂交瘤细胞
细胞培养
筛选，继续培养
足够数量的、能产生特定抗体的细胞群
体外培养
注射到小鼠腹腔
单克隆抗体
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为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？
就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。
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我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
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（三）单克隆抗体的应用
与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，灵敏度高，并可大量制备。