文档介绍：关于可用基因工程及其应用
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三、人类基因组研究
1、什么是“人类基因组”？人类基因组计划中，共测定多少条染色体?
人类基因组：是指人体DNA分子所携带的全部遗传信息。
人的单倍体基因组：有24条双 —GAATTC—
—CTTAAG—
BamHI —GGATCC—
—CCTAGG—
识别反向重复序列，切割后形成黏性末端。
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限制性内切酶EcoRI
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黏性末端：
被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。
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（3）作用结果：产生黏性末端
(也有可能是平末端)
切割DNA分子时产生的两种不同末端
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（4）作用部位：磷酸二酯键，不是氢键
T
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
A
什么叫磷酸二酯键？
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GAATTCCGTAGAATTCGGATT
尝试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端
CTTCATGAATTCCCTAA
GAAGTACTTAAGGGATT
CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
练一练
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
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DNA连接酶与DNA聚合酶有什么区别呢？
（2）作用部位：
磷酸二酯键，不是氢键
G
C T T A A
A A T T C
G
磷酸二酯键
磷酸二酯键
（1）作用对象：
将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子
２、基因的针线──DNA连接酶
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DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？
相同点：
两者都是形成磷酸二酯键。
不同点：
DNA连接酶:是将DN***段上的两个粘性末端连接起来，不需要模板。
DNA聚合酶:在DNA复制中，以DNA一条链为模板，将单个脱氧核苷酸通过磷酸二酯键连接起来，形成一条与模板链互补的DNA链；
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3、基因的运输工具——运载体
②具备条件：
③种类：
能自我复制、稳定保存。 具有多个限制酶切点。 具有某些标记基因。
质粒、噬菌体和动植物病毒。
①作用：
将外源基因送入受体细胞。
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什么是质粒？
细胞拟核外或染色体外能自主复制的双链环状DNA分子
存在于细菌以及酵母菌等生物中
细菌的质粒比细菌的拟核DNA小得多
带有少量基因
常有抗生素抗性基因,使细菌有抗药性
质粒与宿主细胞的关系
质粒的存在对宿主细胞无影响，
质粒的复制只能在宿主细胞内完成
质粒（最常用的运载体）
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常用的运载体——质粒
（标记基因）
（环状DNA分子）
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pBR322
多个酶切位点
抗四环素基因（tcr）
抗安苄青霉素基因（amp）
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二 基因操作的基本步骤
１、提取目的基因——将 需要的基因从供体生物 的细胞内提取出来。
供体生物细胞
取出DNA
用限制酶剪去多余部分
目的基因
限制酶
广泛使用目的基因有：
苏云金杆菌抗虫基因、
人胰岛素基因、干扰素基因、
植物抗病基因、种子贮藏蛋白基因等。
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用限制酶切断成许多片段
⑴直接分离基因法
鸟枪法（散弹射击法）
把带有目的基因的DN***段分离出来
供体细胞中的DNA
限制酶
切成许多片段
运载体
重组DNA
受体细胞
基因扩增（大量复制）
分离含有目的基因的细胞
最大的优点：操作简单
最大的缺点：盲目性大，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。
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⑵人工合成基因
(真核细胞)
DNA合成仪
有两种方法： ①反转录法：
②直接合成法：
目的基因的mRNA
单链DNA
逆转录
双链DNA（目的基因）
合成
氨基酸序列
推测
mRNA核苷酸序列
推测