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North2South 生物素标记和化学发光检测试剂盒
目录号: 17175 (17075,37549,37555,89880)
该试剂盒由探针标记,杂交洗膜和化学发光检测三部分组成
17075(探针标记,纯化和定量)
North2South™生物素随机引物Kit(该试剂盒含有足以完成10次标记反应的试剂,每次可合成至少1ug的生物素标记的探针)
产品名称:
货号
产品描述
17075
North2South™生物素随机引物Kit
10次标记反应,每次可合成至少1ug的生物素标记的探针)
Kit 组分:
Heptanucleotide mix (5X), 100 µl
dNTP mix (5X) (1 mM dATP, 1 mM dTTP, 1 mM dGTP, dCTP), 80 µl
Reaction Buffer (10X), 50 µl
DNA Polymerase, Klenow fragment (3´-5´ exo-),(10 units/µl), 10 µl
Non-biotinylated control DNA*, (250 ng/µl), 5 µl
EDTA, (500 mM, pH ), 1 ml
Nuclease-free water, 1 ml
NH4OAc, (5 M), 1 ml
Biotin-dUTP, 20 µl
储存条件: 所有试剂应该在无霜冷冻-20°冰箱保存
探针标记:
操作步骤:
将20ul生物素标记的N4-dCTP与80ul的5XdNTP混合物充分混合备用(总量100ul)
稀释约100ng线性探针模板至24ul于离心管中(模板DNA要定量和纯化)
加入10ul随机引物(Heptanucleotide mix)于上述离心管中,煮沸变性5分钟,迅速在冰水混合物退火5分钟
加入10ul N4-dCTP与5XdNTP的混合物,5ul 反应缓冲液,1ul Klenow酶片断,混匀
37°孵育60分钟
加入2ul EDTA以灭活Klenow酶活性
探针纯化
操作步骤:
加入5ulNH4OAC于上述50ul反应离心管,吹打混匀
加入110 ul 冰预冷的无水乙醇,充分混匀,冰或-70°放置15分钟
12000rpm 4°离心15分钟
观察沉淀情况,小心吸取出上清,风干沉淀
用冰预冷的70%乙醇洗涤一次,12000rpm 4°离心15分钟,观察沉淀情况,小心吸取出上清,风干沉淀
50ulTE或RNA酶free 的水溶解沉淀(-20℃或-70℃长期保存)
探针定量(17075)
操作步骤:
500ul去离子水,260nm调零
去离子水(即稀释20倍)分光光度计测定OD260值
定量计算公式:1 OD260 dsDNA = 50 μg/ml;
样品浓度(μg/ml)=OD值X50X稀释倍数;
样品浓度μg/ul= OD260值X50X20/1000
样品浓度ng/ul= OD260值X50X20(注:如果稀释20倍,-)
Note:大多数情况下,由于各实验室用来测定核酸的仪器不同,检测灵敏度不