文档介绍：SEA899Hu96T骨桥素(OPN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)适用生物:人使用说明书仅供体外研究使用,不用于临床诊断!第12版(2016年05月修订)[预期应用]本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中骨桥素含量。[试剂盒内容]试剂名称数量试剂名称数量96孔板(预包被)196孔板覆膜4标准品2标准品稀释液1×20mL检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mLTMB底物1×9mL终止液1×6mL洗涤液(30×)1×20mL使用说明书1[需自备的设备及试剂]1、450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)2、单道或多道微量移液器及吸头3、稀释样品的EP管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器7、(或1×)磷酸缓冲盐(PBS),pH=-[试剂盒的储存及有效期]1、未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20oC,其余试剂请置于4oC保存备用。2、使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,此外,请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝箔袋装好,并拉紧密封铝箔袋,置于-20oC保存。注意:试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。[标本的采集与保存]1、血清:将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4oC过夜,然后1,000×g离心20分钟,取上清即可,将上清置于-20oC或-80oC保存,避免反复冻融。2、血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8oC1,000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC或-80oC保存,避免反复冻融。3、组织匀浆:不同类型的组织制备匀浆的方法会有所不同1)取适量组织块,在预冷PBS(,pH=-)中清洗去除血液,匀浆前先称重。2)将组织切成小块,均匀的放入放置在冰上的装有新鲜裂解缓冲液(货号IS007,应依据目标蛋白的亚细胞定位选择不同类型的缓冲液)的玻璃均质器中(微小的组织也要如此)。(质量体积比=1:20-1:50,例如:1mL裂解缓冲液中加入20-50mg组织样本。)3)将得到的悬浊液经过超声处理至澄清。4)将制备好的匀浆液10,000×g离心5分钟,弃沉淀,上清即可用于检测或置于-20oC下保存。4、细胞裂解液:在分析试验之前,细胞需利用以下方法处理:1)贴壁细胞应该用冷PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,于1,000×g离心5分钟后收集。(悬浮细胞可通过离心直接收集)。2)将收集到的细胞用冷PBS洗3次;3)将浓度为107个细胞/毫升的悬浮细胞加入新鲜裂解缓冲液中,如果需要,细胞可以进行超声波处理至溶液澄清。4)将标本于2-8oC1,500×g离心10分钟,弃沉淀,上清即可用于检测或置于-20oC下保存。5、细胞培养上清或其它生物标本:请1,000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC或-80oC保存,避免反复冻