文档介绍：生物工程分解实验
动物急性毒性实验
实验陈述集
班级生工1411
学号
姓名
姑苏科技大学
化学生物与材料工程学院
2017年
实验室学生守则
.严厉遵照实验室各项规章轨制和治理措施，屈服教师及实验技巧人员
的指点.
使学生懂得毒理学研讨中动物实验的通例操纵办法和技巧；懂得和控制为了测定
一种未知的情形化学物对有机体是否是安然的，必须进行哪些实验，获得哪些须要的数
据；这些实验的根本步调是什么，实验数据应当若何处理.
.实验道理
滤纸接触法毒性实验简略易行，实验时光短，实验成本较低，可对受试物毒性进行
初筛.
将蚯蚓与潮湿的滤纸上的受试物接触，可测定泥土中受试物对蚯蚓的潜在影响.
动物机体中有一套有用的抗氧化防御体系(Antioxidantdefense)，包含过氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD).谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione
peroxidase,GPx).过氧化氢酶(Catalase,CAT)等，，并且其变更可定量检测，是以抗氧
化酶常被用作指导情形污染的早期预警，是分子生态毒理学生物标记物的研讨热门之
.
.实验材料与办法
.实验材料与试剂：
活环毛蚓***化镉,Tris-HCl溶液，邻***，磷酸缓冲液
.实验仪器：
人工气象箱，分光光度计，冷冻离心计心情，试管13支,移液器，振荡水浴锅，烧杯，研钵.
.实验办法：
.清肠
将直径11cm的滤纸铺于1000mL烧杯杯底(或造就皿)，加少量水，，用蒸储水清洗，放于烧杯中，用保鲜膜封口,±2C,湿度约75%勺人工气象箱中清肠24h.
.溶液配制
在直径18cm的造就皿(或以1000mL烧杯代替)底铺衬滤纸，以刚好遮住皿底为宜.
按准备实验肯定的剂量，配制系列浓度，取适量倒入造就皿中，以刚好浸没滤纸为宜.
.滤纸实验
.将清肠后的蚯蚓用去离子水冲洗干净，滤纸吸干体表水分.
.每组10条蚯蚓分离称重，测量体长，供试.
.每一造就皿放入10条蚯蚓.
.保鲜膜封口，剖解针扎孔.
.造就与不雅察
.将造就皿置于人工气象箱中造就，设置尺度实验前提：温度为20±2C,湿
度为75±7%;光照为1333lx(间歇光照，即12h光照，12h阴郁).
.在20±2C情形造就.
.，记载逝世亡数，
，.
.盘算Cd2+.
.低浓度Cd2+急性毒性实验
.在肯定蚯蚓的24hLC50后，，空
白对比组用去离子水代替受试物；染毒实验前反复上述(1)步调的清肠.
.在蚯蚓的致逝世规模内设置4个浓度梯度(/
LC50).
.实验24h后取各浓度处理组蚯蚓3条做平行实验，洗净剪取其环带前部分，
用磷酸缓冲液洗失落概况血液，用滤纸吸干水分，放入研钵加2mL磷酸缓冲液进行研磨，再进行离心(9,000r?min-1)10min,上清液即为粗酶液.
.采取改良邻***自氧化法测定SOD舌，性.
①？L-1Tris-HCl(pH=)缓冲液,，混匀后在25c水浴保温20min,掏出后立刻参加25c预热过的3mmolL-1邻***(以10mmol?L-1HCl配制，空白管用10mmol?L-1HCl代替邻***的HCl溶液)，在25c恒温水浴锅中水浴，敏捷摇匀倒入比色皿(光径1cm),每隔30s在325nm处测定吸光度A值1次，，此即为邻***的自氧化速度.
②样品中SOD酶活气测定：参加邻***前，先参加必定体积的SOD粗酶液
(,需稀释)，蒸储水削减响应体积(),
其它均与上述①中所述一致，盘算加粗酶液后邻***
数值均有变更；数值大于1.
：
.受试物的根本物化性质；实验动物的豢养前提().
***化镉：外不雅与性状：无色单斜晶体熔点(C)：568
沸点(C)：960消融性：易溶于水，.
蚯蚓的豢养前提：温度18-22C,光照，包管湿度
.染毒处理前后蚯蚓外不雅发展发育变更表(.