文档介绍：关于液相色谱分析仪法
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一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph
目前常见的HPLC仪生产厂家国外有Waters公司、Agilent phase）。正相与反相的出峰顺序相反。
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正相色谱法：由极性固定相(如氨基与***基键合相)和非极性（或弱极性）流动相 (烷烃类如正已烷、环已烷）所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、***基柱、氨基柱等，代表性的流动相是正己烷。用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、***类、羰基类及氨基酸类等）。吸附色谱也属于正相色谱
反相色谱法；由非极性固定相和极性流动相所组成的HPLC体系，与正相HPLC体系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS柱、 C18、C8 ），代表性的流动相是甲醇-水和乙***-水或水的缓冲液。是当今液相色谱的最主要分离模式。
适用于分离非极性和极性较弱的化合物。为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是，~（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。
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液-液分配色谱固定相的液体往往容易溶解到流动相中去，所以重现性很差，后来在此基础上发展了一种新型固定相---化学键合固定相 。
化学键合固定相：通过化学反应将固定液（各种不同基团）键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。在HPLC整个应用中占80%以上。
键合固定相的载体主要是硅胶，根据在硅胶表面（具有-- ≡Si -- OH基团）化学反应不同可制成四种键合相：
（1）硅氧碳型（ ≡Si—O—C=，硅胶与醇类发生酯化反应）。
（2）硅碳型（ ≡Si—C= ，硅胶与卤代烷反应）。
（3）硅氮型（ ≡Si—N= ，硅胶与***类反应）。
（4）硅氧烷型（ ≡Si —O—Si—C= ，硅胶与有机硅烷反应）。稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广
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化学键合色谱与液液分配色谱一样，也可分为正相和反相色谱。
反相键合色谱采用非极性固定相，键合的基团有C2、C4、C6、C8、C18、C22烷基和苯基。其中最常用的是C18，又称ODS一十八烷基硅烷键合相。所用的流动相为极性溶剂，以水为底溶剂,再加入有机溶剂,最常用的是甲醇-水、乙***-水和四***呋喃-水。
正相键合色谱采用极性固定相，如氨基、***基等极性基团；非极性或弱极性流动相，一般为烃类溶剂，如己烷、庚烷等。
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（1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快；
（2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击；耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定；
（3）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性；
（4）有利于梯度洗脱；
化学键合固定相的特点
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正相色谱法与反相色谱法比较表
正相色谱法 反相色谱法
固定相极性 高～中 中～低
流动相极性 低～中 中～高
组分洗脱次序 极性小的先洗出 极性大的先洗出
从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）
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3. 离子交换色谱 （ion-exchange chromatography）
固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；
流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；
基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；
阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H +
阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH-
应用：碱金属、碱土金属等离子混合物的分离；食品中添加剂和污染物的分离；生物大分子如氨基酸、核酸等。
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（size- exclusion chromatography）
凝胶(具有一定大小孔隙分布)
固定相：化学惰性的多孔性材料，如聚苯乙烯凝胶、
亲水凝胶、无机多孔材料,是有一定孔径的多孔
性填料。
流动相： 在凝胶色谱中，流动相的作用不是为了控
制分离，而是为了溶解样品或减小流动相粘度。