文档介绍：关于紫外可见分光光度法 (8)
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§1 基本原理
利用被测物质的分子对紫外-可见光具有选择性吸收的特性而建立的分析方法。
一、紫外－可见吸光光度法的特点
（1）具有较高的灵敏度。
直角坐标原点的直线。但在实际工作中，往往会偏离线性而发生弯曲。
§2 光度法的误差
0 1 2 3 4 mg/mL
A
。 。 。 。
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0
工作曲线
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一、物理因素
(1)比尔定律的局限性
比耳定律假设了吸收粒子之间是无相互作用的，因此仅在稀溶液（c < 10-2 mol/L )的情况下才适用。
(2)非单色光引起的偏离
朗伯一比尔定律只对一定波长的单色光才能成立，但在实际工作中，入射光是具有一定波长范围的。
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二、化学因素
溶质的离解、缔合、互变异构及化学变化也会引起偏离。
例：
测定时，在大部分波长处，Cr2O72-的k值与CrO42-的k值是很不相同的。A与c不成线性关系。
例：显色剂KSCN与Fe3+形成红色配合物Fe(SCN)3，存在下列平衡：
Fe(SCN)3 Fe3+ + 3SCN－
溶液稀释时一倍时，上述平衡向右，离解度增大。所以Fe(SCN)3的浓度不止降低一半，故吸光度降低一半以上，导致偏离朗伯—比尔定律。
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测量的误差和测量条件的选择
误差来源：入射光源不稳定
吸收池玻璃的厚度不均匀
池壁不平行，表面有水迹，油污或划痕
光电池不灵敏，光电流测量不准确
误差影响：透光度读数误差
一、仪器测量误差
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二、测量条件的选择
1、入射光波长的选择
测量的入射光波长：最大吸收波长λmax。
若干扰物在λmax处也有吸收，在干扰最小的条件下选择吸光度最大的波长。
2、吸光度范围的选择
两式相除：
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不同透光率时测定浓度的相对误差ΔcB/cB(ΔT=)
测定相对误差与透光率的关系
在 T = %(A=)时，浓度测定的相对误差最小。 在实际测定时， ~ (T=20% ~65%)之间。
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3、参比溶液的选择
I0
参比
样品
未考虑吸收池和溶剂对光子的作用
原则:使试液的吸光度能真正反映待测物的浓度。
利用空白试验来消除因溶剂或器皿对入射光反射和吸收带来的误差。
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（1）如果仅待测物与显色剂的反应产物有吸收，可用纯溶剂（或蒸馏水）作参比溶液
（2）如果显色剂或其他试剂略有吸收，应用空白溶液（包括显色剂或其它试剂不加待测试样溶液）作为参比溶液。
（3）如试样中其它组分有吸收，但不与显色剂反应，则当显色剂无吸收时，可用试样溶液作为参比溶液；当显色剂略有吸收时，可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，以此溶液作参比溶液。
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显色剂
§3 显色反应及其影响因素
显色反应：将被测组分转变成有色化合物的
化学反应。
显色剂：能与被测组分反应使之生成有色化合
物的试剂。
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选择性好 所用的显色剂仅与被测组分显色而与其它共存组分不显色，或其它组分干扰少。
灵敏度足够高 有色化合物有大的摩尔吸光系数，一般应有104~105数量级。
有色配合物的组成要恒定 显色剂与被测物质的反应要定量进行。
生成的有色配合物稳定性好
色差大 有色配合物与显色剂之间的颜色差别要大，这样试剂空白小，显色时颜色变化才明显。
一、对显色反应的要求
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二、影响显色反应的因素
1、显色剂的用量
M+R MR