文档介绍：第三军医大学博士学位论文度依赖性。本实验利用复方壳多糖组织工程皮肤技术平台,通过调节培养基的钙浓度影响KC与FB的相互作用,促进基底膜的形成;不同时相加入不同浓度的外源性LN,观察基底膜形成情况;首次将力学环境引入组织工程皮肤研究,模拟在体力学环境,对培养的组织工程皮肤进行垂直应力作用,观察种子细胞生物学行为改变后基底膜形成的情况;、PAS染色、Ⅳ型胶原、Ⅶ型胶原、CKl4、LN等免疫组化染色、电镜等方法,观察基底膜构建情况;在此基础上,采用免疫印迹蛋白表达分析,,;建立平板流动腔模型,对重建了基底膜的组织工程皮肤进行流体剪切力的作用,观察组织工程皮肤对剪切应力的耐受情况,初步评价组织工程皮肤的物理性能;将组织工程皮肤移植于动物全层创面,观察移植物覆盖创面情况。本实验获得如下主要研究结果:(1)通过调节培养基钙浓度和加入外源性LN,成功构建结构良好的基底膜,发现高钙环境和在培养7天后加LN更有助于基底膜的形成,加入高浓度的LN形成的基底膜要明显优于低浓度组;(2)首次建立组织工程皮肤的垂直应力作用模型,通过不同的应力作用,发现每天1次,持续15"--30rain的垂直应力作用,有助于基底膜体外重建;(3)构建了基底膜的组织工程皮肤,其表真皮问Ⅳ型胶原、Ⅶ型胶原及LN的免疫组化反应阳性,表皮下部分CKl4染色呈阳性反应;(4)电镜下可见表真皮间有数目不等的半桥粒形成,尤以垂直应力作用后的组织工程皮肤明显;(5),,,;(6)构建了基底膜的组织工程皮肤,可以抵抗一定的剪切应力,尤以经过垂直应力作用的组织工程皮肤为佳;(7)组织工程皮肤可有效修复动物全层皮肤缺损创面。本研究通过在培养系统中调节钙浓度,添加外源性LN,成功地构建了基底膜结构,、PAS染色、免疫组化、电镜等技术,评价基底膜的组织学结构及重建水平;对LN在组织工程皮肤基底膜重建中的中心作用进行了有益的探索,明确了LN在基底膜分子网络形成中的重要地位;模拟在体毛细血管压力的力学环境,观察了垂直应力作用对基底膜形成的影响,发现给予垂直应力有利于基底膜的重建,并在增加半桥粒的数目上有明显作用;利用平板流动腔模型,对获得的重建了基底膜的组织工程皮肤进行初步的力学评价。本实验结果提示,进行组织工程皮肤器官型培养,,LN添加以20lag/ml为宜,且加入的最佳时间是在培养7天后,组织工程皮肤分层分化最好的时间在培养15天左右。本研究首次提出了优第三军医大学博士学位论文化培养条件的方案,证实了LN一5在重建基底膜中的中心作用;首次在组织工程皮肤研究中引入力学因素,证实了力学环境因素对体外构建基底膜的影响,将为皮肤组织工程的研究开辟新的方向,也为进一步理解体外构建基底膜结构的机制奠定了基础。关键词:基底膜,重建,组织工程皮肤,层粘蛋白一5,角质形成细胞,成纤维细胞,表真皮相互作用,真表皮连接,细胞外基质,半桥粒,钙浓度,剪切力,positeChitosantissue—·engineeredskinAbstractTheskinbasementmembrane(BM),BMpreventsthedirectcontact+,theBMhastheabilityofpermeationandbarrier,,severalkindsoflaminins(suchaslaminins5,6andlO);Ⅳworkthatconfersthed