文档介绍:实验一细胞形态
实验一 细胞形态、细胞器的显微结构的观察
一、实验目的
,掌握光学显微镜的使用方法。
。
二、实验原理
实验一细胞形态
实验一 细胞形态、细胞器的显微结构的观察
一、实验目的
,掌握光学显微镜的使用方法。
。
二、实验原理
细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行研究,首先要从其形态结构人手。所以,要借助显微镜的成像及放大原理,在显微镜下,才能观察到细胞的基本形态结构。
经物镜形成倒立实像,经目镜进一步放大成像。
显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数,还与显微镜的分辨力有关。
~,所用介质的折射率越接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说,介质为空气,~;油镜头用香柏油为介质,。
普通光线的波长为400~700nm,,,所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X。
显微镜的分辨率: 也称为分辨力,它是指能把两个物点辨清的最小距离,
分辨距离越大,则分辨率越低。所以,分辨率是以分辨
距离来表示的。
其计算公式为: D=·A N·A·=n·sina/2
式中D为分辨率,A为光波波长, n=介质折射率;α=镜口角(标本对物镜镜口的张角), N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。镜口角总是要小于180˚,所以sina/2的最大值必然小于1。
在物镜上,有镜口率(.)的标志,它反应该镜头分辨力的大小,其数字越大,表示分辨率越高,各物镜的镜口率如下表:
物镜 镜口率(.) 工作距离(mm)
10×
40×
100×
显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积,
公式为: M = K1xK2
焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时,不仅是这一物点,而且它的
上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全
厚度,必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。
厚标本和薄标本
4 - 5 um
2um
基础知识
4. 激光共聚焦扫描显微镜(具有高分辨率可进行显微断层扫描)
LCSM照片
蓝色为细胞核,绿色为微管
(能观察活细胞)
暗视野显微镜(dark field microscope)的聚光镜中央有当光片,使照明光线不直接进人物镜,只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜,因而视野的背景是黑的,物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子,分辨率可比普通显微镜高50倍。
一种介壳虫的染色体
7. 偏光显微镜(对于双折射物质进行结构研究)
偏光显微镜(polarizing microscope)用于检测具有双折射性的物质,如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。
(图像具有浮雕感)
DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比,其标本可略厚一点,折射率差别更大,故影像的立体感更强。
DIC显微镜下的硅藻(伪彩色)
9. 倒置显微镜(组织培养中长工作距离的)
组成和普通显微镜一样,只不过物镜与照明系统颠倒,前者在载物台之下,后者在载物台之上(右图),用于观察培养的活细胞,具有相差物镜。
10. 显微操作技术
尼康NT-88NE显微操作/注射仪
四、实验用品
各种组织切片
五、 实验步骤
(一)显微镜的使用
1. 观察前的准备工作
(1)观察者要养成显微镜镜检的工作****惯,观察时要双
眼同时睁开,一边观察一边进行记录或描绘。
(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。
(3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整
和正常,并对载