文档介绍：关于酶与细胞的固定化
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第一节：酶的固定化
固定化酶的定义及其特点
酶的固定化:利用一定措施将酶束缚或限制于一定区域内，仍能进行其特有的催化反应，并可回收及重复使用的一类技术。
固定化酶:在一定空是第19页，共112页
1．共价结合法：
结合方法主要有二种：
将载体有关基团活化，然后与酶有关基团发生偶联反应；
在载体上接上一个双功能基团，然后将酶偶联上去。
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E
E
直接结合法
通过双功能基团结合法
载体
双功能基团
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1．共价结合法：
所用载体包括：
天然有机载体（如多糖，蛋白质，细胞）、无机物（玻璃，陶瓷等）和合成聚合物（聚酯，聚***，尼龙）
,但机械强度较差,玻璃和尼龙等强度好但亲水性较差.
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共价结合的方式
有多种方式进行反应,取决于载体上的功能基团和酶分子上的非必需侧链基团.
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载体上常用的功能基团包括:
芳香氨基,羟基,羧***,氨基等
可以与载体结合的酶的功能基团包括：
氨基,羧基,巯基,羟基,咪唑基,酚基等
参与共价结合的氨基酸不应是酶的必需基团
结合基团
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常见的结合方法有10种
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结合方法：
重点掌握溴化***法
活化基团
最常见的方法:
重氮偶联法;溴化***法
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结合方法：
(diazatitation):
适合水不溶性的带芳香氨基的载体.
载体在稀盐酸或亚***钠中进行反应,成为重氮盐衍生物,然后再在温和的条件下和酶蛋白分子上相应的基团如酚羟基,咪唑基或氨基进行共价结合,得到固定化酶
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重氮法 是将带芳香族氨基的载体，先用NaNO2和稀盐酸处理成重氮盐衍生物，再在中性偏碱(pH8—9)条件下与酶蛋白发生偶联反应，得到固定化酶。
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可能与酶蛋白中Tyr的酚基，His的咪唑基生成重氮衍生物，在过量重氮盐存在下还可与酶蛋白的N—端氨基或Lys的ε氨基形成双偶氮化合物。常用载体及其反应如下：
。我国独创的使用对-β-硫酸脂乙砜基***(ABSE—)多糖(纤维素，葡聚糖，交联琼脂糖，交联琼脂及淀粉)属于此类载体。在碱性条件下用对—β—硫酸脂乙砜基***活化多糖，制得的醚键连接的乙砜基苯***衍生物，经重氮化后偶联酶：
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。如L—Leu和对氨基—DL—苯丙氨酸共聚物：待1mol/L的L—Leu和对氨基—DL—Phe的N—羧基酐的苯溶液在少量水存在及室温下进行反应制成。共聚物与亚***作用转变为重氮盐，可供酶固定用。用此法制备的固定化酶有蛋白酶、脲酶、核糖核酸酶等。
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***衍生物。该类衍生物的商品名称为bio—Gel或Enzacry。如EnzacryIAA是含有芳香氨基的聚丙烯酰***衍生物，经重氮化可固定酶。用此法制备的有氨基酰化酶，淀粉酶等固定化酶。
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。这是聚氨基苯乙烯(a)和一种异丁烯一间一氨基苯乙烯(b)的共聚物，通过重氮化后可固定酶．如胃蛋白酶、核糖核酸酶等。
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。
玻璃的化学改造物多孔玻璃在***中与Y—氨基丙基三氧乙烷硅回流加热，生成烷基***玻璃:
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烷基氨玻璃用对硝基苯酚***处理后，再还原，转变为芳香基衍生物:
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此芳香基衍生物经重氮化后与酶结合．产生固定化酶。
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结合方法：
***酸(或异***酸)反应 iso(thio)cyanate reaction
适合含芳香氨基的载体.
芳香氨基先用硫光气处理成异硫***酸(或异***酸)盐的衍生物,然后在极温和的条件下和酶分子的氨基反应.
在中性pH下优先与a-氨基反应,因此有一定的选择性
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结合方法：
***法:
活化固相载体最早的方法之一,是活化多糖类载体的最盛行的方法,也是实验室和工业规模经常选用的方法
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溴化***—亚***碳酸基反应 含有羟基的载体(如纤维素、葡聚