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人类SRY基因PCR扩增实验方案.doc

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文档介绍

文档介绍:人类Y染色体SRY基因的鉴定
一、实验原理 
SRY基因是Y染色体上详细决定生物雄性性别的基因片段。通过PCR扩增技术,对SRY基因进展扩增,可以以此来快速鉴定性别。PCR由变性→退火(复性)→延伸三个根本反响步骤构成。1人类Y染色体SRY基因的鉴定
一、实验原理 
SRY基因是Y染色体上详细决定生物雄性性别的基因片段。通过PCR扩增技术,对SRY基因进展扩增,可以以此来快速鉴定性别。PCR由变性→退火(复性)→延伸三个根本反响步骤构成。1。模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它和引物结合,为下轮反响作准备;2。模板DNA和引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至40~60℃左右,引物和模板DNA单链的互补序列配对结合,假设引物1和1链配对延伸,那么引物2需和2链配对延伸;:DNA模板—-引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于72℃左右,以dNTP为反响原料,靶序列为模板,按碱基互补配对原那么和半保存复制原理,合成一条新的、和模板DNA链互补的半保存复制链并重复循环变性-退火—延伸三过程,最终获得更多的“半保存复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。1~3小时时间就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍.
琼脂糖凝胶电泳是利用不同分子量的DNA在琼脂糖凝胶电泳中电泳速度不同而别离DN***,同时和琼脂糖的浓度也有亲密关系。,在电场中向正极挪动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本身的大小和构型。在凝胶中,DN***段(小于20kb)迁移间隔 (迁移率)
和碱基对的对数成反比,因此通过大小的标准物挪动的间隔 和扩增片段的挪动间隔 进展比较,可检测片段是否存在,也可测出未知片段的大小。此方法结果观测简便,灵敏度较高,而且别离出的DNA可以切胶回收,是如今PCR反响后最常用的检测方法。
实验目的   
掌握PCR反响的根本原理和实验操作
掌握利用琼脂糖凝胶电泳法对条带进展鉴定的方法和实验操作
实验材料、试剂及仪器 
实验材料  男性的口腔上皮细胞及头发毛囊细胞、女性的口腔上皮细胞及头发毛囊细胞
实验试剂  NaOH溶液、 HCl溶液、PCR混合液、10μmol/L SRY引物1、10μmol/L SRY引物2、 无菌水、琼脂糖、1×TAE缓冲液、核酸染料、DNA标样简称marker等
仪器  各种规格微量移液器和枪头、PCR管、配胶板、PCR仪、电泳仪、离心机、凝胶成像系统、电子称、药勺、称量纸、其他各种玻璃器材
实验准备
 SRY引物1和SRY引物2设计:可从NCBI网站搜索该基因相关的文献
以获得引物序列;也可根据NCBI上该基因的碱基序列,借助引物设计软件如Oligo等进展设计,再由引物合成公司合成相关引物。
扩增人的SRY基因,所用引物为: 
SRY1:5’—TGG GAC TGG TGA CAA TTG TC-3’ 
SR