文档介绍：维生素A和维生素E的测定方法
维生素A和维生素E的测定方法
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维生素A和维生素E的测定方法
维生素 A 和维生素 E 的测定方法（ HPLC ）
杨月欣教授等
高效液相色谱法
最小检出2 / 2
维生素A和维生素E的测定方法
无水硫酸钠 Na2SO4
甲醇色谱纯或分析纯重蒸后使用
重蒸水蒸馏水中加入少量高锰酸钾重蒸后使用
苯并〔 e〕芘标准液称取苯并〔 e〕芘（纯度 98%），用脱醛乙醇配制成 1ml 相当于 5μg苯并〔 e〕芘的
内标溶液。
维生素 A 标准液视黄醇（纯度 85% Sigma 公司）用脱醛乙醇溶解维生素 A 标准品，使其浓度大约为 1ml
相当于 1mg视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。维生素 E 标准液 α- 生育酚（纯度 95% Si
gma公司），δ - 生育酚（纯度 95% Sigma 公司），δ - 生育酚（纯度 95% Sigma 公司）。用脱醛乙醇分别
溶解以上三种维生素 E 标准品，使其浓度大约为 1ml 相当于 1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此三
种维生素 E 的准确浓度。
5. 操作步骤
本实验需避光操作
(1) 样品皂化称取样品于三角瓶中，加 30ml 无水乙醇，振摇三角瓶，使样品分散均匀。加入 5ml 10%抗
坏血酸和苯并〔 e〕芘标准液 2ml，混匀。最后加入 10ml 氢氧化钾边加边振摇。于沸水浴上回流 30min 使
样品皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷却。
(2) 样品萃取将皂化后的样品移入分液漏斗中，用 50ml 水分 2 次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用 10
0ml 无水***分两次洗皂化瓶及残渣，***液并入分液漏斗中。轻轻振摇分液漏斗 2min，静置分层，弃去
水层。然后每次用约 100ml 水将***液洗至中性，约 4-5 次。
维生素A和维生素E的测定方法
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维生素A和维生素E的测定方法
(3) 浓缩将***提取液经无水硫酸钠（约 5g）滤入 150ml 旋转蒸发瓶内，用约 15ml ***冲洗分液漏斗及
无水硫酸钠 2 次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于 55℃水浴中减压蒸馏并回收***，待瓶中
***剩下约 2ml 时，取下蒸发瓶，立即用氮气将***吹干。加入 2ml 乙醇溶液，充分混合，溶解提取物。
将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上以 3000 转/min 离心 5 分钟。上清液供色谱分析。
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维生素A和维生素E的测定方法
标准曲线的制备将维生素 A 和维生素 E 标准品配置成标准溶液（约 1mg/ml ），制备标准曲线前用紫外分光光度法标定其准确浓度。标准浓度的标定方法取维生素 A 和维生素 E 标准液若干微升，分别稀释至乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算该维生素的浓度。测定条件如下
标准
比吸光系数
E1%cm
波长 λ， nm
视黄醇
1835
325