文档介绍：血清清蛋白、γ-球蛋白的别离、纯化与鉴定实验报告
生物化学实验报告
姓名：

学号：

专业年级：

组
凝
胶
柱
层
系
除
盐
继续用2ml NH4Ac缓冲液洗涤
收集含有蛋白质的峰液12d
BaCl2检测SO42-阴性
用2~3ml NH4Ac缓冲液再生平衡
继续用2ml NH4Ac缓冲液洗涤
用2~3ml NH4Ac缓冲液再生平衡
BaCl2检测SO42-阴性
收集含有蛋白质的峰液12d
离子交换柱层纯化
漂洗
电泳
准备
将氨基黑染色液倒入培养皿中，用镊子取出薄膜浸入染液中，染色5min。
除盐后收集的球蛋白
用1ml NH4Ac缓冲液清洗层析柱内壁, NH4Ac缓冲液(3ml)洗脱，流出液量约1ml开始检测蛋白质
DEAE-纤维素柱不用再生，可直接用于纯化清蛋白
取浓度最高的1管作纯度鉴定〔醋酸纤维素薄膜电泳法〕
除盐后收集的清蛋白
用1ml NH4AC缓冲液清洗层析柱内壁,用约５ml NH4AC缓冲液流洗，除去α球蛋白和β球蛋白
2管均作纯度鉴定〔醋酸纤维素薄膜电泳法)
DEAE-纤维素柱先用6ml NaCl - NH4Ac溶液流洗，再用10ml NH4Ac缓冲液流洗再生平衡
电
泳
纯
度
鉴
定
从染色液中取出以染好的薄膜放入漂洗液中反复漂洗3~4次，直至背景无色为止。
将浸泡在巴比妥缓冲液中的醋酸纤维薄膜用镊子取出，用滤纸吸去多余的缓冲液，。
离子交换柱再生和蛋白纯度鉴定
用盖玻片一端沾取2~3μl待测新鲜样品，然后将沾有样品截面与纤维素薄膜点样线处轻轻接触，待血清完全渗入薄膜后移开。
将薄膜架在电泳槽上，点样面朝下，点样端置阴极，盖上电泳槽盖。电泳50min。
点样
染色
过DEAE-纤维素层析柱〔×6cm〕
过DEAE-纤维素层析柱〔×6cm〕
收集含有清蛋白的洗脱液每管10d，连续收集2管
磺基水杨酸检测蛋白质
NH4AC缓冲液(约3ml)洗脱，流出液量约2ml开始检测蛋白质
收集含有蛋白质的洗脱液每管10d，连续收集3管
磺基水杨酸检测蛋白质
四、结果与讨论：①结果：实验数据、现象、图谱；②讨论：以结果为根底的逻辑推论，并得出结论。
结果：
粗提〔盐析法〕:如图1所示，往血清中缓慢滴加饱和硫酸铵溶液后，溶液变浑浊，呈乳白色。离心后，溶液分为上层的上清液和下层沉淀，上清液呈浅黄色〔见图3〕，沉淀为白色。如图2所示，使用移液枪吸取上清液，从而别离上清液和沉淀。沉淀加水后溶解，为无色溶液〔见图4〕。

图1 血清加饱和硫酸铵溶液图2 别离上清液和沉淀

图3 上清液图4 沉淀加水后溶解
脱盐〔凝胶层析法〕和纯化〔离子交换柱层析鉴定〕：如图5所示，往层析柱中加样前，应先将层析柱中的上层液放出，用小烧杯接废液，。与葡聚糖凝胶G-25层析柱相比照，DEAE-纤维素层析柱的液体流出速度更缓慢。如图6所示，往磺基水杨酸和BaCl2溶液中分别滴入流出液，生成白色沉淀，说明流出液中含有蛋白质。白色沉淀越多，说明液体所含的蛋白质越多，以此选取浓度最高的1管球蛋白进行醋酸纤维素薄膜电泳。

图5 DEAE-纤维素层析柱图6 磺基水杨酸和BaCl2检测蛋白质呈阳性
〔红色圆圈为磺基水杨酸，蓝色圆圈为BaCl2溶液〕
纯度鉴定〔电泳〕：如图7所示将醋酸纤维素薄膜架于电泳槽上，进行电泳。如图8所示，染色后，薄膜上可见5条深蓝色横纹。
图7 直流稳压电泳仪