文档介绍:实验五血糖含量的测定
二、实验原理
血液中所含的葡萄糖,称为血糖。它是糖在体内的运输形式。
本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。其原理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛,分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的
实验五血糖含量的测定
二、实验原理
血液中所含的葡萄糖,称为血糖。它是糖在体内的运输形式。
本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。其原理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛,分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的薛夫氏碱,通过比色可以定量。
三、试剂和器材
试剂
邻甲苯胺试剂:, 加邻甲苯胺150mL及饱和硼酸40mL, 混匀后加冰醋酸至1000mL, 置棕色瓶中,冰箱保存。
葡萄糖标准溶液:。
材料
动物血清
器材
×15cm(×8);分光光度计。
四、操作方法
取6支试管编号后,按下表顺序加入试剂:
加毕,温和混匀,于沸水浴中煮沸4min取下,冷却,放置30min,用1cm比色杯,试剂空白为参比,测定630nm 处吸光值,绘制标准曲线。
管号
0
1
2
3
4
5
标准葡萄糖液(mL)
蒸馏水(mL)
邻甲苯胺试剂(mL)
A630
2、样品测定
取3支试管编号后,分别加入试剂,与标准曲线同时作比色测定:
管号
对照
样品①
样品②
稀释的未知血清样品(mL)
蒸馏水(mL)
邻甲苯胺试剂(mL)
A630
加毕,温和混匀,于沸水浴中煮沸4min取下,冷却,放置30min,用1cm比色杯,试剂空白为参比,测定630nm 处吸光值,从标准曲线中可查出样品中血糖含量。
五、注意事项
该法一般在浓酸高温条件下发生反应, 在做血糖测定时须多加注意。