文档介绍：肝功能检查指标的选择与评价
一、实验目的
掌握：血清转氨酶、胆红素测定的方法和原理；
熟悉：重氮试剂法测定血清胆红素的操作步骤；
了解：血清转氨酶、胆红素测定的临床意义。
ALT、AST测定
测定方法：连续监测肝功能检查指标的选择与评价
一、实验目的
掌握：血清转氨酶、胆红素测定的方法和原理；
熟悉：重氮试剂法测定血清胆红素的操作步骤；
了解：血清转氨酶、胆红素测定的临床意义。
ALT、AST测定
测定方法：连续监测法、赖氏法
连续监测法测定丙氨酸氨基转移酶基本原理：
L-丙氨酸+α-***戊二酸 α-***酸+L-谷氨酸
α-***酸+NADH 乳酸+NAD+
连续监测法测定天门冬氨酸氨基转移酶基本原理：
L-天门冬氨酸+α-***戊二酸草酰乙酸+L-谷氨酸
草酰乙酸+NADH+H+ L-苹果酸+NAD+
连续监测法测定NADH被氧化为NAD+,可在340nm处连续监测到NADH被氧化引起吸光度下降速率，该下降速率与ALT、AST活性呈正比。
二实验原理
ALT
LDH
AST
MDH
三、试剂与器材
丙氨酸氨基转移酶试剂盒：
R1: α-***戊二酸、NADH、乳酸脱氢酶（LDH）
R2：L-丙氨酸、Tris缓冲液
天冬氨酸氨基转移酶试剂盒：
R1: α-***戊二酸、NADH、苹果酸脱氢酶（MDH）、乳酸脱氢酶（LDH）
R2：L-天门冬氨酸、Tris缓冲液
四、操作步骤
：取 10ml的R2，溶解一瓶R1，充分溶解后即为工作液。
：水浴锅调温 37 ℃。紫外分光光度计，预热，波长340nm。
：
3. 混匀，37℃水浴1min，于空白管校零，精确读取1、2、3min吸光度，计算样本每分钟吸光度变化率△A/min。
注：为减小误差，可先把工作液37℃水浴5min，混匀直接上机检测。
加入物空白管样本管
血清 - 300uL

生理盐水 300uL -

工作液 3mL 3mL
五、结果计算
ALT或AST（U/L）=△A/min× ×
=△A/min× ×
1000
ε
Vt
Vs
1000

Vt
Vs
△A/min为两次测定的平均值
Vt=反应总体积
Vs=血清体积
ε =，比色皿光径1cm时的摩尔吸光系数。
六、参考范围
ALT（37℃）：男性≤40U/L
女性≤31U/L
AST（37℃）：男性≤37U/L
女性≤31U/L
七、临床意义、肝硬化（肌炎、胸膜炎、肾炎、肺炎）
八、注意事项
，避免影响酶活性；
；
，试剂不能使用。
TBIL、DBIL测定
结合胆红素未结合胆红素+加速剂（破坏氢键）
二、实验原理
+
重氮试剂
偶氮胆红素呈紫红色，测A546nm
重氮盐法：（亚***钠、对氨基苯磺酸）
对氨基苯磺酸+HCL+NaNO2→***化重氮苯磺酸+NaCL
三、试剂与器材
TBIL试剂R1主要成分：对氨基苯磺酸
盐酸
十二烷基三******化铵
DBIL试剂R1主要成分：EDTA
对氨基苯磺酸
盐酸
TBIL、DBIL试剂R2主要成分：亚***钠
TBIL、DBIL校准品（）
四操作步骤
TBIL测定：
：取R1和R2按5:1的比例混合待用；
：取2ml蒸馏水复溶待用；
：
，37℃保温10min，于546nm测定“A”。
DBIL测定：
：取R1和R2按40:1的比例混合待用；
：取2ml蒸馏水复溶待用；
：