文档介绍：生活饮用水微生物指标检验
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检测依据：GB 5750-2006
《生活饮用水卫生检验规范》
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实验目的与要求
掌握水样采集规则及注意事项。
熟悉常用水卫生细菌8h后，所得1mL水样所含细菌菌落的总数 。
培养基：
营养琼脂
设备：
放大镜/菌落计数器
现在学板计数法
现在学板计数法
[方法]
水样摇匀20次左右，使细菌分散。
倾注培养：无菌吸取1ml水样分别置于2个空平皿，另一个作空白对照。再倾注15ml琼脂（约45℃）于平皿中旋转，混匀待琼脂凝固后倒置37℃48h。
菌落计数：用肉眼或放大镜检查，计数平皿内菌落数目。
现在学板计数法
[结果分析与报告]
计算平均菌落数：
报告方式：菌落总数(cfu/ml)。 cfu：colony forming units
当检样的菌落数为l~100时，按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字报告。
国家标准（GB5749-2006）规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超过100个。
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（二）水源水
[器材与试剂]
无菌1ml吸管6支/组，无菌10ml吸管1支/组。
无菌平皿9个/组，营养琼脂。
90ml灭菌盐水1瓶（内置适量玻璃珠），9ml灭菌盐水管3支。
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[方法]
稀释水样：
无菌吸10ml混匀水样注入90ml灭菌水瓶中,混匀成1:10水样。
取1:10水样1ml注入9ml灭菌试管中混匀成1:100水样。同法稀释成1:1000, 1:10000水样。
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[方法]
倾注培养：
用1ml无菌吸管吸取2~3个适当浓度的稀释液1ml,分别注入无菌平皿中，每个稀释度应同时做2个平皿，另取一平皿作空白对照。再做倾注培养(方法同饮用水)。
菌落计数：方法同饮用水。
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菌落总数测定
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[结果分析与报告]
计算不同稀释度的平均菌落数：
稀释度的选择和菌落总数报告方式：
首先选择平均菌落在30～300之间者进行计算。
计算方法和报告方式如表1所示。
菌落总数平板计数法
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表1 稀释度选择及菌落总数报告方式
例
次
不同稀释度的平均菌落数
两稀释
度菌落
总数之比
菌落总数
(cfu／m1)
报告方式
(cfu／m1)
10-1
10-2
10-3
1
2
3
4
5
6
7
8
1365
2760
2890
150
多不可计
27
多不可计
0
164
295
271
30
4650
1l
305
0
20
46
60
8
513
5
12
0
—
2
—
—
—
—
16400
37750
27100
1 500
513000
270
30500
<1×10
×104
×104
×104
×103
×105
×102
×104
<10
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由表2可判定水质被污染的程度。
表2 一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系
水的类别
最清洁水
清洁水
不太清洁水
不清洁水
极不清洁水
菌落总数
cfu／m1
10~100
100~
1000
1000~
10000
10000~
100000
＞100000
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[注意事项]
菌落总数测定中，应选择合适的稀释度进行。
（生活饮用水，国家标准规定每毫升不得超过100个，因此可以直接吸取1毫升到平板进行培养）
各稀释管、相应平皿做好标记。包括：水样名称、稀释度、时间、小组。
严格无菌操作。进行水样稀释时，每一稀释度均需更换吸管。
倾注时，要注意营养琼脂的温度。
倾入琼脂后要混匀，待琼脂凝固后倒置培养。
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三、总大肠菌群的测定 —多管发酵法
分为三步：
初发酵试验
平板分离
复发酵证实试验
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多管发酵法
定义：
总大肠菌群指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
培养基：
乳糖蛋白胨培养液
二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液
伊红美蓝培养基