文档介绍：真菌感染实验诊断
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一、真菌的形态特性
（一）单细胞真菌呈圆形，如酵母菌。
（二）多细胞真菌由菌丝和孢子组成，
称丝状菌或霉菌。
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菌丝和孢子的形份作
镜检和培养)。
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4．严格无菌操作并进行消毒处理，
尤其是采集血液和脑脊液标本，
要避免污染杂菌。
5．采集标本立即送检深部真菌标
本最长不得超过2h。
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第三节真菌检验
一、标本直接检查
(一)显微镜检查
直接镜检对真菌病的诊断较细菌更为重要。
许多真菌标本不需染色即可直接镜检，如癣病
标本多用KOH湿片检查法，即取病发或病损部位
皮屑、甲屑置于载玻片上，加1滴10％-20％ KOH
液，然后加盖玻片并微微加热，使标本组织溶解
透明，在显微镜下可观察到真菌的孢子和菌丝。
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直接镜检的意义
直接镜检阳性表示：
①有诊断意义，如浅部真菌病等；
②看到的就是真菌的形态，可确定某
些致病性真菌的属或种, 如假丝酵
母菌的厚膜孢子等；
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③判断某些真菌种的致病性等,如
皮肤癣菌、曲霉等。
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直接镜检也有局限性：
①阴性结果不能排除真菌感染；
②有假阳性结果。
因此，对直接镜检可疑结果应
作复查或用其他检验方法鉴定。
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(二)抗原检测
常用的方法有胶乳凝集试验、
ELISA、半定量放射免疫法。
均应设对照，防止发生假阳
性和假阴性。
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用胶乳凝集试验检测标本中的白
假丝酵母菌甘露聚糖抗原。
用胶乳凝集试验和ELISA检测血
清和脑脊液中的隐球菌多糖荚膜抗
原，在治疗前检测非常敏感特异。
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用半定量放射免疫法检测血清、
尿液和脑脊液中荚膜组织胞浆菌循
环多糖抗原，可快速诊断。
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二、真菌的分离培养
真菌培养是目前鉴定真菌的惟一
方法。培养真菌的温度为28℃，
但深部真菌为37℃。菌落是鉴
别真菌的方法。注意以下几点：
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①菌落性质：酵母菌还是霉菌；
②菌落大小，病原性真菌菌落小，
而条件致病性真菌菌落大；
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③菌落颜色病原性真菌颜色淡，
污染真菌颜色深；
④致病性真菌菌落下沉，有时使
培养基开裂；污染性真菌菌落
不下沉,很少引起开裂。
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三、真菌的生化反应
用于主要深部感染真菌如假丝酵
母菌、隐球菌等。
(醇)类发酵试验 37℃孵育，
观察糖发酵情况。
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含菌生理盐水
与已融化的固体同化碳源培养
基(45℃)混合，然后在培养基
上分别加糖，置25℃孵育观察
结果。若24h后无变化可重复
加糖。如能同化周围有生长圈，
否则无生长。
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同化碳源试
验相同，但需用无氮源的培
养基，不要加糖类，而加入
***钾。
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四、动物实验
实验的目的是分离病原性真菌、
确定真菌菌种的致病性、研究药物
对真菌的作用等。如假丝酵母菌接
种家兔或小白鼠，肾脏明显肿胀，
肾皮质部位有白色脓疡。
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五、核酸检测
医学真菌的鉴定手段引入了分子生
物学的鉴定方法，从核酸碱基G+C
mol％分析、限制性片段长度多态
性(RFLP)、Southern印迹分析到脉
冲场凝胶电泳(PFGE)、PCR指纹、
随机扩增多态性DNA(RAPD)以及DNA
特殊片段测序等。
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（一)G+Cmol％分类鉴定法
常用热变性温度法。原理是DNA加热变性使碱
基氢键被打开，双链螺旋变成单链，导致核
苷酸碱基在260nm紫外吸收明显增加，完全
变成单链后，紫外吸收增加停止。紫外吸收
增加的中点值温度为热变性温度（Tm）。
若真菌DNA中G+C碱基对含量多，Tm值就高。
可直接反映G +C碱基对的绝对含量。
计算公式为：G+Cmol％=(Tm-)×
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(二)真菌核型的脉冲电泳分析
脉冲凝胶电泳技术(PFGE)解决
了真菌大分子DNA的分离技术难题。
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原理：PF