文档介绍：1/5生物化学实验报告费林试剂热滴定定糖法姓名于佳喜学号201300140120学院生命科学学院年级2013级生物基地班2/5一、。。。。。。,计算细胞存活率二、实验原理还原糖是指含有自由醛基(如:葡萄糖)或***基(如:果糖)的单糖和某些二糖(如:乳糖、麦芽糖)。在碱性溶液中,还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原,而糖本身被氧化成各种羟酸类化合物。该特性常用于糖的定性和定量测定。实验采用费林试剂热滴定法,费林试剂是氧化剂,由甲、乙两种溶液组成。***蓝(氧化还原指示剂);,酒石酸钾钠和亚铁***化钾。当甲、乙两溶液混合时,硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中,酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物,该含Cu2+络合物的溶液,被还原后得到砖红色Cu2O的沉淀。因此,斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。费林试剂热滴定定糖法的基本原理,是在沸热条件下,用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时,将费林试剂中的铜离子还原为氧化亚铜,以亚***蓝为指示剂,稍过量的还原糖立即将蓝色的氧化型亚***蓝还原为无色的还原型亚***蓝,指示滴定终点。三、(定量):费林甲液:称取15克硫酸铜(CuSO4·5H2O)***蓝,溶于1000毫升水中。费林乙液:称取50克酒石酸钾钠、54克氢氧化钠和4克亚铁***化钾溶于1000毫升水中。:称取葡萄糖(预先在105℃烘干,恒重)1克,用少量蒸馏水溶解后加入8毫升浓盐酸(防止微生物生长),再用蒸馏水定容至1000毫升。。%氢氧化钠溶液。:将碘化钾20克及碘10克溶于100毫升水中。使用前需稀释10倍。3/~14试纸。(1)25毫升碱滴定管。(6)万能夹(2)移液管(5、10毫升)(7)铁架台(3)100毫升溶量瓶(8)点滴板(4)100毫升锥形瓶(9)水浴锅(5)滴管(10)600瓦电炉五、、乙液各5毫升和蒸馏水5毫升放入250毫升的锥形瓶中,再用滴定管加入一定量的标准葡萄糖液,混匀后放在石棉网上加热,应使瓶内溶液在2分钟内达到沸腾,以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色消失为止。沸腾前加入的标准葡萄糖液量与沸腾后滴定时所用的标准葡萄糖液量的总和,就是测定空白时耗用的标准葡萄糖液毫升数(V1)。全部滴定过程必须在沸腾状态下快速进行,一般应在3分钟内完成。因此,除控制滴定速度外,滴定前需加入一部分标准葡萄糖液。加入该液的数量,应在正式滴定前的预备滴定试验时确定,,加入6N盐酸10毫升,蒸馏水15毫升,混匀。沸水浴加热半小时后,取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全,若已经水解完全,则不呈现蓝色。冷却后用1