文档介绍：山东大学实验报告 2021/11/4
姓名：XX 系年级：2021级XX班学号：202100XXXXXXX
实验题目: 动物细胞培养同组者: XXXXX
动物细胞培养技术
【实验1mm2，每个小方格的面积为1／400mm2，盖上盖玻片后，，所以每个计数室(大方格)，每个小方格的体积为l／4000mm3。使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
图1 血球计数板的构造〔a、平面图；b、侧面图〕
山东大学实验报告 2021/11/4
姓名：XX 系年级：2021级XX班学号：202100XXXXXXX
实验题目: 动物细胞培养同组者: XXXXX
图2 血球计数板网格的分区和分格
【实验器材】
、二氧化碳培养箱、离心机、眼科剪、眼科镊、培养皿、培养瓶、离心管、微量加样器、吸管、酒精灯；小鼠、培养基 
、盖玻片、滴管、显微镜；培养的小鼠脾脏细胞、台盼蓝、伊红
【实验步骤】
小鼠脾脏细胞的培养
1〕. 取材：
取小白鼠一只，采用断头法处死，清水洗净小白鼠并浸于75%酒精中灭菌3min，取出转入超净工作台内的解剖盘内，无菌操作翻开腹腔，取出脾脏，去除周围的脂肪组织，镊起脾脏用PBS液自上而下冲洗1-2次，转入无菌玻璃培养皿中，待用。
2〕. 别离脾细胞：
用滴管先向上述无菌玻璃培养皿中滴入PBS液30滴，，然后将其沿脾脏长轴方向注射入脾内，用针尖在脾脏上扎眼，并用L形针头轻刮脾脏外表挤出脾细胞，用滴管吸皿中的PBS液冲洗脾脏并吹散挂出的脾细胞，稍微倾斜并静置1-2min，吸取上述静置后的脾细胞悬液上清局部放入Eppendorf管，以3000转/别离心1-2min。
3〕.培养脾细胞：
从超净工作台中区塑料培养皿一个，用“枪〔1ml〕〞参加细胞培养液2ml，并在皿上做记号，待用。取上述离心后的Eppendorf管，在超净工作台内翻开弃去上清液，用“枪〔200μl〕〞吸取塑料皿中的培养液400ul，参加弃去上清液的Eppendorf管中，用枪头吹匀管底的脾细
山东大学实验报告 2021/11/4
姓名：XX 系年级：2021级XX班学号：202100XXXXXXX
实验题目: 动物细胞培养同组者: XXXXX
胞，然后吸取200ul脾细胞悬液接种于上述塑料培养皿中，混匀，然后放入37℃，5%的二氧化碳培养箱中培养。
〔二〕. 台盼蓝法坚决细胞的死活
试剂配制：
%台盼蓝染液，备用。
细胞悬液制备：
将生长有贴壁型细胞的培养瓶〔皿〕中的培养液倒入干净试管中，向培养瓶〔皿〕%胰蛋白酶/%EDTA混合消化液1-2ml，静置3-5min，待见到细胞变圆，彼此不连接为止，弃去混合消化液并将上述试管中的培养液倒回培养瓶中，用滴管轻轻吹打细胞，制成细胞悬液。
染色制片：
，加1-2滴〔〕染液，混合，2min后制成临时装片，镜检。
染色结果：
死细胞染成蓝色，活细胞不着色。
〔三〕. 血球计数板进行细胞计数
染色计数：
，加1-2滴〔〕染液，混合2-5min，滴加少许染色后的细胞悬液于放有盖片的血球计数板的斜面上，使悬液自然充满计数板小室〔注意：不要使小室内有气泡产生，否那么要重新滴加；在普通光镜10´物镜下计数四个大格内的细胞数，压线者数上不数下，数左不数右〕。
根据染色结果计算活细胞率：
依据死细胞染成蓝色、活细胞不着色的原那么计数死细胞数和细胞总数，以如下公式计算细胞存活率：
每毫升液体中细胞的数=每个大方格中的细胞数量*10000*稀释倍数
【实验结果】
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姓名：XX 系年级：2021级XX班学号：202100XXXXXXX
实验题目: 动物细胞培养同组者: XXXXX
从培养箱拿出的培养基
在倒置显微镜下可以清晰的看到培养的细胞，细胞呈圆形，形状规那么，聚集在一起，有立体感。
山东大学实验报告 2021/11/4
姓名：XX 系年级：2021级XX班学号：2021